Trombosit süspansiyonlarında ışınlanma, lökositten arındırma ve saklama sürelerinin trombosit aktivasyonu ve apoptoza etkilerinin flow sitometrik incelenmesi

Abstract

ÖZET Trombosit konsantreleri rutin kan bankası saklama koşullarında trombosit depolanma hasarı denilen değişiklikler gösterir. Trombositler in vitro saklama koşullarında 5-6 gün beklemesi ile biyolojik aktivite ve canlılıkları da kaybolur. Ve apoptozun morfolojik bulguları ortaya çıkar. Diğer taraftan transfüze edilen trombositlerde bulunan lenfositler ve bunlardan salgılanan sitokinler graft versus host hastalığına neden olabilir. Bunu önlemek için uygulanan irradiasyon ve filtrasyon işlemlerinin trombosit depolanma hasarına ve apoptoza etkileri tartışmalıdır. Beş gün süresince depolanan trombosit membranlannda CD62p ve Annexin V ekspresyonunu 'flow' sitometri ile araştırdık. Onbeş aferez trombosit süspansiyonu Fenwall CS-3000+ aferez makinesi ile toplandı. Bunun yarısı filtre edildi, düğer yansı filtre edilmeden saklandı. pH, CD62p ve Annexin V aseptik koşullarda filtre edilen ve edilmeyen, 0. gün 2500 cGy gama ışınıyla irradiye edilerek saklanan ve saklanırken test gününde (0-3-5. günler) aynı dozda irradiye edilen, ve irradiye edilmeyen trombositler çalışıldı. Filtre edilen ve edilmeyen gruplar arasında CD62p ve Annexin V değerlerinde anlamlı fark yoktur. Her iki gruptada irradiye edilen trombositlerde CD62p ekspresyonu anlamlı olarak yüksek bulundu. pH'lar ise 5. gün, 0. günden anlamlı olarak düşük bulundu. Lökosit azaltımı için filtre kullanımının trombosit canlılığına faydası gösterilemedi. Eski bilgilere göre irradiasyon, aferez trombositlerinde CD62p ekspresyonunu azaltması bekleniyordu. Çalışmamızda tek donörden aferez yoluyla toplanan trombositlere, filtre edilsin veya edilmesin, irradiasyon uygulanmasının trombosit fonksiyonlarım değiştiren etkilerinin olabileceği gösterildi. ANAHTAR SÖZCÜKLER: Trombosit depolanması, irradiasyon, filtrasyon, trombosit aktivasyonu, apoptoz.

İNGİLİZCE ÖZET (ABSTRACT) Platelet concentrates stored under routine blood bank conditions undergo changes so-called platelet storage lesion. Platelets lose their biological reactivity and viability after 5 to 6 days of in vitro storage, and display morphological sign of apoptosis. Donor T-lymphocytes and subsequent cytokine release during platelet storage may cause transfusion reactions including graft- versus-host disease. The effect of gamma irradiation on single-donor apheresis platelets (SDPs) has not been elucidated precisely to date. Using flow cytometry, we investigated platelet membrane expression of CD62p and annexin V binding in platelets stored up to five days. Eighteen apheresis platelets were collected into two bags with Fenwall CS-3000 Plus systems and thereafter divided into two units. One of the each pair was filtered on day 0 and the second constituted non-filtered. Irradiation was performed on one unit on days 0, 3 and 5 with 2500 cGy. pH, CD62p and annexin V were measured on days 0, 3 and 5 in samples drawn aseptically from every unit. We compared data of platelets between filtered and non-filtered, and irradiated on day 0 and irradiated on the day of testing, and non-irradiated platelets. No significant difference was found between filtrated and non-filtrated platelet groups of CD62p and annexin V values. There was a significant increase in CD62p expression in irradiated group (pO.OOO) irrelevant of filtration. Our study indicates that leukocyte depletion show no benefit on platelet viability. Gamma irradiation of apheresis platelets is expected to inhibit the expression of platelet CD62p according to existing data. Our study showed that irradiation might change platelet functions whether WBC-reduced or not. KEYWORDS: platelet storage, irradiation, filtration, platelet activation, apoptosis. m