Sisplatinin Nanopartiküller Aracılığıyla HeLa Hücre Hattı Üzerine Etkisi

Abstract

Bu çalışmada HeLa kanser hücre hattında kitosan nanopartiküllerine yüklü sisplatinin salınımı ve hücrelerdeki apoptotik ve nekrotik etkisi ile glutatyon- S- transferaz pi (GST pi) izoenzim ekspresyonu araştırılmıştır. Düşük molekül ağırlığındaki kitosan çapraz bağlayıcı olan TPP ile muamele edilerek kitosan nanopartikülleri sentezlendi. Kitosan nanopartiküllerin boyutu Taramalı Elektron Mikroskobu (SEM) ve Atomik Kuvvet Mikrosobu (AFM) ile 100-200 nm arasında olduğu tespit edildi. Kitosan nanopartiküllerine yüklenen cisplatin zamana göre salınımı Graphite Furnace-Atomic Adsorption Spectrometer (GF-AAS) ile tespit edildi. Sisplatin (CDDP) yüklü kitosan nanopartikülleri ve kitosan nanopartikülleri kanser hücrelerine aktarıldı. Hücrelerin ince yapı görüntüleri ve nanopartiküllerle etkileşimi Taramalı Elektron Mikroskobu (SEM) ile gözlemlendi. Artan sisplatin dozuna bağlı olarak apoptotik etkinin arttığı tespit edildi. Sisplatin, kitosan nanopartikülleri ve cisplatin yüklü kitosan nanopartiküllerinin HeLa kanser hücrelerindeki sitotoksik etkisi WST-1 testi ile tespit edildi. Kitosan nanopartiküllerinin sitotoksisik olmadığı ancak, sisplatin dozuyla birlikte arttığı gözlemlendi. Sisplatin ve cisplatin yüklü kitosan nanopartiküllerinin hücrelere uygulanmasının ardından kaspaz 3 antikoruyla yapılan immunositokimyasal ve ikili boyamalarla apoptotik etki ve ikili boyamayla nekrotik etki incelendi. Apoptotik indeksin, sırasıyla % 60±5 ve % 53±4 ve ikili boyama sonucuyla paralel olduğu, ikili boyama sonucuna göre nekrotik indeks sırasıyla % 64.2±3 ve 60.3±2 olarak bulundu. Antioksidan bir enzim olan GST pi antikoruyla yapılan immünositokimyasal boyamayla GST pi ekspresyonu gösterildi. GST pi ekspresyonu sisplatin alımına bağlı olarak en yüksek % 63±2 bulundu.

In this study, the release of cisplatin, loaded on chitosan nanoparticles applied with the appropriate dose and duration in HeLa cancer cell line and its apoptotic, necrotic effects and the expression of glutathione-S-transferase pi isoenzymes in HeLa cancer cells were investigated. Chitosan nanoparticles were synthesized with low molecular weight chitosan by treating with cross-linking, TPP (tripolifosfat). Chitosan nanoparticles size were found to be between 100-200 nm with Scanning Electron Microscope (SEM) and Atomic Force Microscope (AFM). The release of cisplatin loaded on nanoparticles was detected by Graphite Furnace-Atomic Adsorption Spectrometer (GF-AAS). Chitosan nanoparticles loaded with cisplatin (CDDP) and chitosan nanoparticles were incubated with HeLa cancer cells. Images of cells fine structure and their interaction with nanoparticles were observed with Scanning Electron Microscope (SEM). The cytotoxic effects of cisplatin, chitosan nanoparticles and chitosan nanoparticles loaded with cisplatin to HeLa cancer cells were detected by WST-1 assay method. It was observed that chitosan nanoparticles were not toxic, but its toxicity was increased by increasing dose of cisplatin. After the cisplatin and nanoparticles loaded with cisplatin administration into HeLa cells, apoptotic index by the caspase-3 immunocytochemical and double stainings, necrotic index were examined. It was found that their indexes obtained by both staining were parallel, 60±5%, 53±4% in high cisplatin dose respectively, and 64.2±3%, 60.3±2% in necrotic index, respectively. The increasing apoptotic effect were determined. The relationship of GST pi expression and its substrate cisplatin doses were studied in HeLa cancer cells by immunocytochemical staining. GST pi expression was found as 63±2%.