Kondrosit hücrelerinin poli(hidroksietil metakrilat) temelli disulfide ile çapraz bağlanmış makro gözenekli hidrojeller üzerinde kültürü

Abstract

Artrit dünyada fiziksel sakatlığın önde gelen nedenlerindendir. Tıp bilimindeki gelişmeler hastalarda kayıp fonksiyonların yeniden kazandırılmasını sağlamıştır. Bu terapiler hastaların yaşamını değiştirmiş ya da kurtarmış olsa da eksik çözümlerdir. Son yıllarda, doku mühendisliği yaklaşımları osteoartrit gibi dejeneratif eklem hastalıklarının tedavisinde uygulanmıştır.Bu tezde, kondrositleri kriyojel üzerinde kültüre ettik ve onların morfolojik, biyokimyasal ve moleküler biyolojik özelliklerini inceledik.Çeşitli tedavi metotları olmasına rağmen kesin çözüm henüz yoktur. Bu tedavi metotlarından biri de doku mühendisliği yaklaşımıdır. Yapılan bu tez çalışmasında kondrositler kriyojeller üzerinde kültüre edilerek morfolojik, biyokimyasal ve moleküler biyolojik özellikleri araştırılmıştır.Monomerlerin sulu çözeltilerinin şırınga kolon içerisinde -12ºC' de dondurulmasıyla gerçekleştirilen yığın polimerizasyonu ile poli (hidroksietil metakrilat) [poli (HEMA-MAH)] hazırlandı. Eridikten sonra, gözenek özelliği taramalı elektron mikroskobuyla (SEM), kondrositlerin kriyojel üzerindeki morfolojik özellikleri SEM mikroskobuyla; glikozaminoglikan (GAG) miktarı, hücre çoğalması, DNA miktarına bağlı olarak spektrofotometrik olarak ölçüldü. Kollojen tip II miktarı PCR yöntemiyle tespit edildi. Toksisitesi WST metodu ve propodium iodit ile boyanarak tespit edildi.Sonuç olarak kondrositlerin kriyojel üzerine tutunduğu, karakteristik özelliklerini gösterdiği tespit edilmiştir. Ancak uzun süreli inkübasyonlarda bu özelliklerini kaybettiği görülmüştür.

Arthritis is the leading cause of physical disability in the world. Advances in the medical science have enabled doctors to restore loss functions in their patients. Although these therapies have saved or improved the live of patients, they remain imperfect solutions. In last years, tissue engineering approaches have been applied in the treatment of degenerative joint diseases such as osteoarthritis.In this thesis, chondrocytes were cultured on the cryogels and their morphological, biochemical and molecular biological characteristics were investigated.Poly (hydroxy ethyl methacrylate) [poly (HEMA- MAH)] were prepared bulk polymerization that proceeds in aqueous solutions of monomers at-12ºC frozen inside in the syringe column. After melt, pore properties of cryogels and condrocytes cultured cryogels were showed by SEM microscope, glycosaminoglycan (GAG) content was measured spectrophotometrically, cell proliferation on cryogels was determined by fluorescentspectrophotometer depending on the amount of DNA. The amount of collagen type II was detected by PCR. Toxic effect of cryogels to condrocytes was detected with WST method and by staining propodium iyodide.As a result, the chondrocytes attached cryogels, the characteristic features have been identified. However, these properties were lost at cultures after long-term.