Anaerobik gut fungusu izolasyonu, moleküler tanımlanması ve linoleat izomeraz enzimi üzerine çalışma

Abstract

Rumen mikroorganizmaların hayvanların tüketmiş oldukları bitkisel materyalin enzimatik yollarla parçalanmasında aldıkları rolün yanı sıra son yıllarda bu grubun rumen içerisindeki olası diğer fonksiyonları yoğun ilgi alanı oluşturmaktadır. Bu fonksiyonlardan birini de linoleik asitten konjuge linoleik asit sentezinde almış olduğu roldür. Linoleik asitten stearik aside kadar olan transformasyonda rumen bakterilerinin biyohidrojesnasyon faaliyetleri yoğun olarak çalışılmış olmasına karşın rumen funguslarının bu işlemde aldıkları görev hakkındaki bilgiler henüz oldukça kısıtlıdır. Bu çalışmada rumen funguslarının linoleik asitten konjuge linoleik asite transformasyonu araştırılmıştır. Bu amaçla KSÜ BİGEM laboratuarında inek dışkısından anaerobik gut fungusu izolasyonu yapılmış ve saflaştırılan izolatlar morfolojik ve moleküler olarak tanımlanmıştır. İzolatlardan saflaştırılmış ve GMLF54 olarak isimlendirilen fungus Neocallimastix sp olarak tanımlanmıştır. Elde edilen anaerobik gut fungusu fungal genomik DNA'dan PZR amplifikasyonu yapılmış ve moleküler kimliği oluşturulmuştur. Bu izolat Neocallimastix frontalis sp. fungusu olarak tanımlanmıştır. Daha sonra bu fungusun linoleat izomeraz enzim üretimi üzerine çalışma yapılmıştır.

Besides of their roles in enzymatic biodegradation of plant material, anaerobic gut fungi (AGF) have been subjected to extensive studies about their possible functions in the gastro intestinal tracts of various mammalians, sucgh as formation of conjugated linoleic acid from dietary linoleic acid. The role of rumen bacteria on the biohydrogenation process of the linoleic acid to the stearic edge has been extensively studied. However, search on the role of AGF in this unique niche has been, hitherto, neglected. In this work, an anaerobic gut fungal isolate has been purified from freshly voided faecal sample of cow, designated as GMLF54 and deposited in the culture collection of Biotechnology and Gene Engineering Laboratory of KSÜ. Isolate GMLF54 was pupatively identified as Neocallimastix sp according to its morphological characters and supporting molecular data (ITS region sequence). Moreover Linoleate isomerase enzyme of this isoloate, responsible for the formation of conjugated linoleic acid (CLA) from linoleic acid, was partially characterised.