Hücre kültürlerinde hücre devri açısından deneysel incelemeler

Abstract

- 40 ÖZET Bu tez çalışmasında asenkron ve senkron L-Strain hücre kültürlerinde Hydroxyurea, Cy to s îne-arabino s ide ve Bleomycin'- in etkisi 3H-TdR ile ki temleriyle araştırıldı.. 3 m etkisi H-TdR ile kısa süreli ve devamlı damgalanma yön- Asenkron L-Strain hücreleri Hydroxyurea, Cy tos ine-ara- binoside, Bleomycin ile 6 ve 24 saat inkübe edildikten sonra hücrelerdeki kısa süreli ve devamlı damgalanma indeksi 54-144 saatler arasında tesbit edildi. Senkron hücreler mitotik seleksiyon ile elde edildi. Hydroxyurea, Cy tos ine-arabinos ide, Bleomycin, G.. fazında bir saat veya G, fazında bir saat ve S fazında bir saat olmak üzere inkübasyon medyumuna verildi. Hücreler G fazında üç sitostatik ile bir defa inkübe edildikten sonra, G../S, S ve G` fazlarmdaki damgalanma indeksi tayin edildi. Üç sitostatik ile Gn fazında inkübe edilen hücreler v 1 ayrıca aynı s itos tat ikler le S fazında bir s'aat inkübe edildi. Bu hücrelerin S ve G~ fazlarmdaki damgalanma indeksi tayin edildi. Asenkron ve senkron deney sonuçları değerlendirildi ğinde Hydroxyurea ' nm ortamdan alınmasından sonra DNA sente zinde kısmi düzelme olduğu fakat G, (Gn) hücrelerinin uyarıl-- 41 madiği sadece devir içindeki hücrelerde damgalanma indeksinin arttığı görüldü. Cytosine arabinoside ile inkübe edilen hücrelerde, Cy tosine-arabinos ide ' in ortamdan alınmasından sonra DNA sen tezi yapan hücre sayısında dikkate değer yükselme olmadığı tesbit edildi. Senkron kültürlerde ikinci defa S fazında Cy tos ine-arabinos ide ile inkübe edilen hücrelerin S/G` geçi şinde tamamen durdurulduğu görüldü. Bleomycin ile 6 saat inkübe edilen hücrelerde kısa sü reli damgalanma indeksi izlenen bütün saatlerde az bulundu. Buna karşılık devamlı damgalanma indeksi 144'üncü saatte kon trol düzeyine yükseldi. Yirmidört saatlik Blemycin ile inkübe edilen hücrelerde kısa süreli ve devamlı damgalanma indeksi azalmıştı. Bununla beraber senkron ve asenkron hücrelerde damga lanma indeksi azaldığı halde morfolojik bozukluk görülmedi. Ayrıca G.. fazında bir defa Blomycin ile inkübe edilen senkron hücrelerin G` deki damgalanma indeksi bu deneyin S fazmdaki damgalanma indeksine göre artmış bulundu. Buna göre Bleomy- cin'in S fazmdaki süresini uzattığı saptandı.

- 42 - SUMMARY In this thesis study, effect of Hydroxyurea, Cytosine- arabinoside and Bleomycin on asynchronized and synchronized 3 mouse L-Straxn cell culture has been investigated with H-TdR and by with the pulse and continuous labeling methods. The asynchronized L-Strain cells, after being incubated with Hydroxyurea, Cy t os ine-arabinoside and Bleomycin for 6 and 24 hours, the pulse and continuous labeling index in there cells has been examined between 54-144 hours. The synchronized cells have been obtained through mitotic selection. Hydroxyurea, Cy t osine-arabino s ide and Bleomycine have been given to the incubation medium, one hour in G.. phase or one hour in G1 phase and one hour in S phase, the cells after being incubated once in G phase with three cytostaties, then labeling indeks in GjS, S and G` phases has been determined. The cells which have been incubated with three cytostatics in G, phase have also been incubated with the same cytostatics for an hour in S phase and the labeling index in S and G` phases has been determined. After the results of the asynchronized and synchronized experiments have been evaluated, it is found out that after taking Hydroxyurea from the medium there has been a partial improvement in DNA synthesis, but it was seen that G, (G~)43 cells have not been stimulated but only there has been an increase in the labeling indexs of the cells which were in the cycle. In the cells which have been incubated with Cytosine - arabinoside it was confirmed that after Cy to s ine-arabino s ide has been taken from the medium there has not been a consider able increase in the cells which make DNA synthesis. In Synchronized cultures the cells which have been incubated with Cy tos ine-arabinos ide, for the second time in S phase, have been completely arrested in the S/G2 transition. In the cells which have been incubated with Bleomycin for 6 hours, the pulse labeling index has been found rather ceased in each observed hours. In opposition to this, the continuous labeling index rose to the control level at the 144th hour. In the cells which have been incubated with Bleomycin for 24 hours, the pulse and continuous labeling index were reduced. However, morphological disorder was not seen in the asynchronized and synchronized cells whic were incubated with Bleomycin, although there was a decrease of labeling index. Also the labeling index in G~ phase of the synchronized cells, which have been incubated once with Bleomycin in G-. phase, has been found increased when compared with considering the labeling index of S phase of this experiment. According to this it is confirmed that Bleomy s the S neriod