Yüksek organizmaların ribozom proteinleri üzerinde bir çalışma

Abstract

V. ÖZET açan Karaciğeri rıoozom proteinleri SDS-PAG, üre-PAG ya da Kaltsehıtidt ve Wittrnann 21) PAG elentrofcrezi ile a y ? rıştırılarak incelerdi. 2jJ PAG elekirof orezi m CİTl] p j. a ı ' ı n n a 71 ribozoın proteini belirlendi. Literatür verileri ve SDS- PAG bulguları değerlendirilerek bu proteinler mole/ '11 ağır lıkları açısından tanımlanmaya çalışıldı. Ribczom protein lerini preparatif düzeyde ve eşzamanlı saf laştırabilmek için geliştirilen yöntemde karboksimetiJ selüloz kolon kro- matograi'isi sonunda değişik LiCİ derişimlerinae. sekiz grup ta kesimienen proteinler ikinci aşamana üre-PAG elektrofo- eıektroelüsyon ile toplanıp analitik SDS-PAG ile incelen diğinde büyük ölçüde saflaşmış oldukları görüldü. Ribozomlar radyoaktif KEK ile e okileştiril diğinae de- p 1 c- 1 L.' `)_r> p '`?; q t» p b v O r; I p f » a;nı olar ciraA ue ıs. craniaraa PEK bağladıkları, fakat önceden BF-2 ile kompleksleşen ribo- zomların genelde dana çok sayıda I-, EK molekülü bağladıkları gösterildi. Bulgular, bulundukları değişik konf ormasyonlara larının değişebildiğini, EF-2'rıirı GîP ile birlikte riDczcna Dağlanmasının ise genelde ribo-zom koni'cr;,,asycnunc& oır gevşemeye ned; £L. o : SH-grupiarına czgü biıonksi yonelleştirilen r i boz omlar dan eKstrakte eailen ribozom protein leri SDS-PAG elektrot orezinde incelendi. rrotein profille- rinaeki bazı bantların ortadan, kalkması ribozom üzerinde SH-grupları içeren proteinlerden bazılarının birbirine ya kın komşu, olduğunu ve ayıraç aracılığı ile Kovalent Di çim de birleşmiş olduğunu gösterdi. Ep-2'nin OPDK aracılığı ile (ya da Ki ve I0 varlığında) ribozoma kovalent Dağlan ması faktörün ribcsoma bağlanma bölge since bazı £H-pro tein lerinin bulunduğunu ve bunların f a k t ör ün SE grupları ile yakın oir konuma girdiklerini gösterdi. OPDK ile etkilt-ş- tirilmiş ADPR-Er-2 ribozom kom olcKSİerinoen proteinlerin n oaeıanaıgı proteinlerin tanımlanmasına.

VI. SJKKARl Rat liver ribosoraai proteins have been analysed Dy SDS-PAG, urea-PAG or Kaltschrrjidt-Wittinann electrophone tie separation tecnniques. Same 71 proteins have thus been ooserved in electrcpnoretic maps. Utilizing tne data froir, SliS-PAG and' from literature, tne proteins were characteri- zea in regards to their molecular weight. In purifying preparative quantities, the ribosornal proteins were divided into eight fractions through earboxymethyl cellulose column chromatography at varying LiCl concentrations. Following the successive electrophoretic separation on urea-PAG, the protein fractions in the gels were eluted electrophore- tically. ineir final analysis on SI'S -PAG gels indicated a satisfactory degree of purification. Although the binding of radio-actively labelled KEK to ribosomes has shown variations between different preparations, generally the ribosomes in complex vita EF-2 have been shown to bind PEK in larger quantities. These findings indicate that changes in the number of accessible SH-groups on the ribosomes deperc on tne :onf orma.tions.Riboscmal proteins extracted from ribosomes reacted with SH- group specific bifunctional reagent OPEL nave been analysed in SES-PAG electrophoresis. Profiles of proteins lacking certain bands indicate that some proteins containing SK-groups are in close proximity to each other to get cross-linked via 0?DM. The covalent binding of EP-2 tc the ribosome in the presence of OPDK (or of KI and I~) indicates that some ribosomal SH- groups are located in the binding site for EP-2 and that tnese can come in close contact with some of the SH-groups of the factor. An attempt was made tc identify tne rioosomal proteins cross-linked to EF-2 by the electrophone tie analysis of proteins extracted from ADPK-EF-2.ri bo some complexes after treatment with OPEL.