Biyoteknolojik yöntemlerle rennin (peynir mayası) eldesi

Abstract

Özet Bu çalışmada arteri Fennin (peynir mayası) ihtiyacım karşılamak için teknolojisi ileri ülkelerde olduğu gibi renninin (kimozinin) gen teknolojisi teknikleriyle eldesi için gerekli ön koşulların oluşturulması amaçlanmıştır. Çalışmanın hedef noktasını kimozin iRNA'sının eldesi ve saflaştırılması oluşturuldu. Bu işlem için değişik şirdeni er den rennin izole edildilerek rennin yönünden zengin doku tespit edildi. Abomasum C4. mide) dan totalRNA çıkarılarak içersinden rennin mRNA'sımn var olduğu belirlendi. Oiigo ÖT selüloz kromotagraf isi ile mRNA saflaştırıldı. moleküler hibritleme sonucunda saflaştırılan mRNA ' nın C rennin riRNA ' sı yönünden ) zenginleştiği görüldü, Yapılan 3/1 poly U hibritlemesi ile mRNA' ların hibritler oluşturduğu ve başlangıç RNA'ya göre çok daha saf olduğu göz1endi. Elde edilen mRNA kesiminden rennin geninin bilinen nükleoiit dizisi ve PCR teknikleri yardımı ile rennin cDNA'sımn sentezine çalışıldı. Total RNA dan ters transkripsiyonla sentezi enen tek zincir rennin cDNA'sı PCR ile çoğaltıldı. Çoğaltılan rennin geni elektroforez ve moleküler hibr i tlemeyîe gösterildi. Bu genin aktarılacağı vektör ( pBR322-pHC9 > DNA ları izole edildi. Böylece Rennin geninin kionlanabilmesi için gerekli ön koşullar sağlanmış oldu. 59

SUMMARY The purpose of this research is the optimization preliminary conditions necessary to produce rennin by using recombinant D>MA and gene engineering techniques, as in the developed countries, to overcome the increasing rennin need. The target of this research was the purification of chymosin ffiRNA, For this process rennin samples have been isolated from animals abomasum of various to obtain a tissue which was rich in rennin. Total RNA was extracted from abomasum Cchymin> and the mRNA was purified by oliqo dT cellulose column cromotography. By using molecular hybridization techniques and poly U. It- was observed that the isolated mRNA contains high amount rennin mRNA showed. The of single chyroin of rennin cDNA was synthesised from the RNA by reserve transcription. The gene of rennin was amplified by PCR technology by using synthetic digonucleotides as primers in order to have a sufficient amount of gene for a successfull cloning. The amplified rennin gene was controlled by electrophoresis and molecular hybridization. Plosmds pBR322 and pHCS were prepared for cloning of the rennin gene. - 60 -