Çözünür elastin türevinin in vitro nonenzimatik glikozillenme özelliği

Abstract

58 ÖZET Proteinlerin nonenzimatik glikozillenmesi özellikle son yıllarda üzerinde önemle durulan bir reaksiyondur. İn vivo ve İn vitro ortamlarda meydana gelebilen bu olay çeşitli araştırmacılar tarafından organizmanın farklı proteinlerinde incelenmiştir. Biz bu çalışmada su ve sulu ortamlar da çözünmeyen bir skleroprotein olan elantinden elde ettiğimiz çözünür elastin türevinin in vitro nonenzimatik glikozillenme özelliğini inceledik. Çalışmamızda elastin sığır aortasından Balo ve Banga tarafından önerilen yöntemle izole edildi. Elastin 0,5 N HCl-etanol çözeltisinde 3,5 saat 65°C de hidroliz edilerek suda ve sulu ortamlarda çözünebilen bir türev protein elde edildi. Bu çözünür elastin türevinin selüloz asetat elek- troforezi biri büyük diğeri çok küçük iki fraksiyondan oluştuğunu, büyük fraksiyonun serum gammaglobulin, küçük fraksiyonun ise serum albumin mobilitesine sahip olduğunu gösterdi. Yine yapılan amino asid analizi ami no asid bileşiminin büyük oranda elastinle uyum içinde olduğunu ortaya koydu. Çözünür elastin türevinin in vitro nonenzimatik glikozillenme özelliği gerçekleştirilen ön deneylerce saptanan bir yönteme göre incelen di. Buna göre çözünür elastin türevi, pH:7.4 olan ve 27.7 mM ile 55.5 mM konsantrasyonunda glukoz içeren iki farklı fosfat tamponu içinde 24, 48 ve 96 saat sürelerle 37°C de inkübe edildi. Kontrol deneyleri glukoz içer meyen fosfat tamponu kullanılarak gerçekleştirildi. Çözünür elastin türevi-59 nin glikozillenme değerleri Parker ve arkadaşları tarafından önerilen yön- teme göre kolorimetrik olarak saptandı. Bu yöntem glikozillenmiş hemog lobin dahil tüm proteinler için kullanılabilme özelliğini taşımaktadır. Elde edilen bulguların sonuçları, çözünür elastin türevinin orta mın glukoz konsantrasyona ve zamana bağlı olarak in vitro nonenzimatik glikozillenme özelliği gösterdiğini ortaya koymuştur.

60 SUMMARY The nonenzymatic glucosylation of proteins is a reaction that has been followed up with interest in the last years. This reaction which may be produced in vivo and in vitro medias, has been examined by many investigators in different proteins of the organism. In this study we investigated, the in vitro nonenzymatic glucosyla tion characteristic of soluble elastin derivative, we have obtained from elastin, a scleroprotein which is insoluble in water and aqueous solution. In our study, elastin has been isolated from bovine aorta thoraci- ca with the procedure Balo and Banga. We had hydrolized elastin for 3,5 hours at 65°C in 0,5 NHCl-etanol solution and obtained a protein derivati ve which is soluble in water and aqueous solutions. The celulose acetate electrophoresis of this soluble elastin deri vative showed that it was composed of two fractions, one is big and the other is too small. The big fraction has gammaglobuline and the small frac tion has serum albumin mobility. In addition to that the amino acid anly- sis showed that, amino acid composition was in a harmony with elastin. The in vitro nonenzymatic glucosylation property of soluble elas tin derivative was investigated in respect to a method that was determined with recent experiments. In this method, the soluble elastin derivative was61 incubated in 37°C for 24, 48 and 96 hours inervals, in two different phosp- i hate buffers which possess 27,7 mM and 55,5 mM glucose respectively and in pH: 7.4. The glycosylation values of the soluble elastin derivative was determined colorymetrically according to the method suggested by Parker et all. This method can be used for all proteins including glucosylated hemoglobin. The results of our findings showed that the soluble elastin deri vative exhibited an in vitro nonenzymatic glycosylation characteristic according to the glucose concentration of the media and time.