Midye manto dokusu beta-galaktozidazı

Abstract

ÖZET Bu araştırmada Türkiye sahillerinde bulunan midye türü olan Mytilus galloprovincialis ' in manto dokusu B-galaktozidazı elde edildi ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesiyle bio- kimyasal işlevinin belirlenmesi amaçlandı. Deneyin yapılacağı gün toplanan midyelerin kabukları çıkartıldıktan sonra manto kısımları ayrılarak homojenize edil di. J3-galaktozidaz aktivitesi gösteren fraksiyon homojenatın santrifüje edilmesiyle elde edilen ham ekstreden % 25 - % 50 amonyum sülfat kesidi ile ayrıldı, dializ edildi ve hidroksil- apatit kolona uygulandı. PH'sı 6.8 olan artan molaritede fosfat tamponu ile yapılan kromatografi sonucu, enzim, 50 mM fosfat tamponu ile elde edildi. Bu suretle midye manto dokusu B-galaktozidazı % 9 verim ile yaklaşık 19 kez saflaştırılmış oldu. J3-galaktozidaz aktivitesi gösteren fraksiyon ile yapı lan deneyler sonucunda, enzimin optimal PH'sınm 1.85, optimal26 temperatürünün ise 49 C olduğu belirlendi. Midye manto p-galak- tozidazının 4-nitrof enil-J3-D-galaktopiranozide karşı Km değe- -3 rinin 1.59 x 10 olduğu saptandı. Midye manto dokusu J3-galaktozidazının galaktoziltrans- feraz aktivitesi, enzimin laktoz üzerine etkisi sonucu meydana gelen bazı oligosakkaridlerin ince tabaka kromatograf isi ile belirlenmesi sonucu taptandı. Yukarıda özetlenen bulgulardan J3-galaktozidazın midye manto dokusundaki p-galaktozid bağı içeren bileşiklerin hidrolizi yanında, adı geçen bağların sentezini de sağladığı ileri sürüldü.

SUMMARY In the present study £-galactosidase was isolated from the mantle tissue of Mytilus galloprovincialis, a mollusc species existing in the coasts of Turkey. It was intended to elucidate the biochemical function of the enzyme by means of examining some of its kinetic properties. After removing the shells of the mollusc collected from seabord on the day of the experiment, the mantle tissue was separated and homogenized, ^-galactosidase active fraction was obtained from the crude extract, acquired by centrifugation of the homogenate, in 25 % - 50 % ammonium sulphate concentration, then it was dialized and applied to hydroxylapatite column. Elution by means of molarity gradient of phosphate buffer PH 6.8 resulted in the appearance of the enzyme at 50 mM buffer concentration. Thereupon mollusc mantle tissue JJ-galactosidase was purified 19 fold at 9 % efficiency.28 Experiments on p-galactosidase from the mantle tissue of mollusc. Showed that optimum temperature and PH of the enzyme was 1.85 and 49 C respectively. Km of J3-galactosidase -3 was found 1.59 x 10 for 4-nitrophenyl-p-D-galactopyranoside. Galactosyltransferase activity of JB-galactosidase was determined by identification of some oligosaccharides on thin- layer chromatography plates as a consequence of the action of the enzyme on lactose. The results of the present study lead to suggest that J3-galactosidase is responsible for hydrolysis of J5-galactoside linkages in the mantle tissue of mollusc as well as for synthesis of the aforesaid bonds.