Midye (Mytilus galloprovincialis L.) hepatopankreasında beta-glukozidaz aktivitesinin incelenmesi

Abstract

ÖZET Türkiye kıyılarında yaşayan ve Rumelikavağından toplanan Mytilus galloprovincialis L. 'nin sindirim sistemi ni oluşturan hepatopankreaslardan homojenat hazırlandı. Santrifüje edilen homojenatın üstte toplanan ve `ham ekstre` adı verilen kısımda, B-glukozidaz aktivitesi gözlemlendi. Enzim aktivitesi saptanan kısmın uygun (% 35-60) amonyum sülfat konsantrasyonunda çöktürüldükten sonra çökeltinin, suda çözülmesi ile elde edilen çözeltinin dialize edilmesi sonucunda hazırlanan `amonyum sülfat kesiti` hidroksilapatit içeren kromatografi sütununa uygulandı. Sütundan geçirilen ve pH'ları 6.8 milimolarite leri farklı olan fosfat tamponları ile yapılan elüsyonlar sonucunda 50 mM'lık ve 200 mM'lık tamponlarla toplanan fraksiyonlarda birer izoenzim bulunduğu görüldü; 50 mM'lık tamponla elüe edilen ve birinci izoenzimi içeren fraksiyon F., 200 mM'lık tamponla elüe edilen ve ikinci izoenzimi içeren fraksiyon F2 olarak adlandırıldı. Bu suretle, Mytilus galloprovincialis L. hepatopankreasında iki B-glukozidaz izoenziminin bulunduğu kanısına varıldı. Bunlardan F- fraksiyonunda bulunan izoenzimin F` fraksiyonunda bulunandan daha yüksek spesifik aktivite gösterdiği saptandı. F1 fraksiyonundaki B-glukozidaz izoenziminin opti mum temperatürünün 48 C, optimum pH'sının 4.3 olduğu, F2'de bulunan izoenzimin ise en yüksek aktiviteyi 42 C'de gösterdiği ve biri 3.8 diğeri 7.1 olmak üzere iki optimum pH ' sının bulunduğu gözlemlendi. Fl ve F2 fraksivonlarındaki substrat, 4-nitrofenil-B- D-glukopiranozide karşı Km değerlerinin sırasıyla 10.7xl0-5 M29 -5 ve 9.2x10 M en yüksek reaksiyon hızları (Vmax )'nın yine sırasıyla 11.7 mM 4-nitrofenol/dakika ve 11.1 m M 4-nitrofenol/dakika olduğu bulundu.

SUMMARY A homogenizate is prepared from the hepotopancreas, the digestive system, of Mytilus galloprovincialis L. which is the variety that lives on the coasts of Turkey and the specimen for the experiments was collected from Rumelikavağı seaboard B-glucosidase activity is observed at the supernatant fluid, which is called `crude extract`, obtained as result of centrifugation of the homogenizate. `Ammonium sulphate fraction`, prepared by initially precipitating the enzyme active proportion of the supernatant fluid at convenient ammonium sulphate concentration (35-60 %) later dialyzing the precipitate, was applied to chromato graphy column filled with hydroxylapatite. Elution was carried out with phosphate buffers of different milimolari- ties, each at pH 6.8, and it was observed that isoenzymes existed in 50 mM and 200 m M eluates. The first izoenzyme eluted at 50 mM, the second one at 200 mM phoshate buffer were called F- and F` respectively. Consequently two B-glucosidase izoenzymes were obtained from the hepatopanc- reas of Mytilus galloprovincialis L. under the experimental conditions. It was found that izoenzyme in F. fractions showed higher specific activity compared to the one in F` fraction. F! B-glucosidase izoenzyme had optimum temperature at >o, 48 C, optimum pH 4.3, F`-izoenzyme displayed maximum activity at 42°C and ] pH 3.8, the other at 7.1. activity at 42 C and possessed two pH optima, one at It was shown that izoenzymes in F- and FQ fractions had Km values 10.7x10 M and 9.2x10 M respectively, maximum reaction rates (V ) 11.7 mM 4-nitrophenol/min. max and 11.1 mM 4-nitrophenol/min. respectively if 4-nitrophenyl- B-D-glucopyranoside is the substrate.