Lipid peroksitlerinin ölçümünde kullanılan yöntemlerin karşılaştırılması

Abstract

52 ÖZET Çalışmamızda, lipit peroksidasyonu 3 farklı modelde uyarılmıştır. Bu uyarılma sonucu oluşan ürünler farklı yöntemlerle ölçülmüş ve bu yöntemler arasındaki ilişki incelenmiştir. Sonuçlarımıza göre; 1- CCI4 (1 ml/kg, i.p) uygulanmasından 2 saat sonra sıçanların total karaciğer homojenatlarında üç farklı yöntem ile malondialdehit (TBARS), dien konjugatı, lipit hidroperoksit ve protein karbonil grubu düzeyleri ölçülmüştür. Lipit peroksidasyonun uyarıldığı bu koşulda; Üç farklı yöntemle ölçülen MDA düzeylerinin kendi aralarında korelasyon gösterdiği saptanmıştır. Ayrıca, dien konjugatı ve lipit hidroperoksit düzeyleri arasında da korelasyon bulunmuştur. Buna göre; karaciğer homojenatlarında lipit peroksidasyonun varlığını gösterme ve şiddetini takip etme açısından MDA düzeylerini ölçmek için kullanılan Slater-Sawyer veya Buege-Aust metodlarından sadece birisinin, veya aynı şekilde dien konjugat ya da lipit hidroperoksit düzeylerinden de bir tanesinin yeterli olabileceği düşünülebilir. 2- NADPH ve ADP-Fe3+ ile uyarılan sıçan karaciğer mikrozomlarında 0,1 0,20,30, 60-cı dakikalarda lipit peroksidasyon kinetiği incelendiğinde, uyarılmanın 10. cu dakikada başlayıp 60.cı dakikada maksimuma ulaştığı gözlenmiştir. Her bir zaman aralığında TBARS, lipit hidroperoksit ve protein karbonil grupları istatistiksel olarak anlamlı artışlar göstermiştir. Bu modelde TBARS, lipit hidroperoksit ve protein karbonil grupları arasında korelasyon bulunamamıştır. Bulgularımıza göre ikinci model olan NADPH ve ADP-Fe3+ ile uyarılmış mikrozomlarda olayın seyrini saptamak açısından TBARS'ları arasından sadece Slater-Sawyer veya Buege-Aust'un yönteminin yeterli olabileceği ileri sürülebilir. 3- Üçüncü model olan Cu2+ ile inkübe edilen saflaştırılmış insan plazma LDL'sinde zamana bağlı olarak lipit peroksidasyon ürünlerinde anlamlı artışlar saptanmıştır. Slater ve Buege'e göre ölçülen TBARS arasında bir korelasyon gözlenmiş ve bunlardan sadece birisi ile birlikte, yine birbirleri ile korelasyon gösteren Lipit hidroperoksit ve dien konjugatı yöntemlerinin de uygulanmasının da gerektiği gösterilmiştir.

53 SUMMARY In this study, Lipid peroxidation is stimulated in three different models. The resulting products are determined with various methods; the relation among which are also investigated. According to the results; 1- MDA (TBARS), dien conjugate, lipid hydroperoxide levels and protein carbonyl function are measured in rat liver homogenates two hours after CCI4 treatment (1 ml/kg i.p) with three different methods. MDA results of these three methods and dien conjugate and lipid hydroperoxide levels are well correlated. Thus; in order to determine and follow the intensity of Lipid peroxidation, either the method of Slater-Sawyer or that of Buege-Aust in addition to dien conjugate or to Lipid hydroperoxide measurements can be used. 2- When lipid peroxidation is investigated in rat liver microsomes 0,10,20,30,60 minutes after stimulation with NADPH and ADP-Fe3+, it is observed that initial stimulation has started at 10th minute and has reached maximum at 60th minute. TBARS, Lipid hydroperoxide levels and protein carbonyl function are found significantly increased at every time interval. However no correlation is observed among TBARS, Lipid peroxide levels and protein carbonyl function. In this model also, either the method of Slater-Sawyer or that of Buege-Aust can be sufficient for the determination of TBARS. 3- Lipid peroxidation is found significant elevated in isolated human LDLs determination of incubated with Cu2+ in addition to lipid hydroperoxide or dien conjugates, the use of either TBARS methods can be efficient.