Netilmisin sülfatın 4-kloro-7-nitro-benzofurazan (NBD-C1) ile yüksek basınçlı sıvı kromatografik miktar tayini

Abstract

- 49 - 6. ÖZET Bu çalışmada, antibiyotik etki gösteren netilmisin sülfatın iktar tayini için 4-kloro-7-nitrobenzofurazan (NBD-C1) ile luoresans gösteren tllrev oluşumuna dayanan bir yUksek basınçlı ıvı kromatografisi yöntemi geliştirildi. Netilmisin slilfat ile NBD-C1 belirteci arasındaki eaksiyonun pH 9.0 da, 70 ° C sıcaklıkta, 30 dakika sürede, lelirtec/netilmisin mol oranının 50 olması halinde kantitatif ılarak yürüdüğü saptandı. NBD-netilmisin tlirevi amonyak katılan eaksiyon ortamından diklormetan ile ekstre edildikten sonra, jilikajel sUtunda 1.1 mL/dak akis hızında kloroform- letanol-amonyak (60:30:0.5) cözüctl sistemi kullanılarak cromatograf iye edildi. Fluorimetrik detektörün eksitasyon ve îmisyon dalga boyları sırasıyla 470 nm ve 520 nm idi. Pik alanları ile netilmisin konsantrasyonları arasındaki ilişkinin 5.3-49.9 ng/10 n-L konsantrasyon aralığında doğrusal olduğu gözlendi. Geliştirilen HPLC yöntemi, netilmisin sülfatın enjektabl Dreparatlarda miktar tayinine uygulandı. Sonuçlar farmakope /öntemi ile elde edilen sonuçlarla t- ve F- testleri uygulanarak- 50 - statistiksel olarak karşılaştırıldı. Geliştirilen yöntem ve armakope yöntemi arasında ortalamalar ve standart sapmalar önünden % 95 olasılık düzeyinde anlamlı bir fark olmadığı aptandı. Geliştirilen HPLC yöntemi ayrıca, plazmada netilmisin ülfat miktar tayinine uygulandı. Netilmisin sUlfatın plaz- adan geri kazanılabllme oranının % 84.1 olduğu belirlendi, aglıklı bir göntilltlye intramUskUler olarak 150 mg netilmisin erildiginde, 9.4 ng/mL plazma konsantrasyonuna (Cmax) » saat sUrede (tmax) ulaşıldığı ve ilacın yarılanma ömrUnlln 2.27 aat (t^) olduğu saptandı.

- 51 - 7. SUMMARY In this study, a high pressure liquid chromatographic sthod was developed for the determination of netilmicine ilphate which has an antibiotic activity, by means of the luorescence showing derivative formed with 4-chloro-7- itrobenzofurazan (NBD-C1). The reaction between netilmicine sulphate and the reagent 3D-C1 was determined to proceed quantitatively at pH 9.0, D°C, in 30 minutes, when the reagent/netilmicine mol ratio s 50. After the NBD-netilmicine derivative was extracted with ichlormethane from the reaction medium, added ammonia, it was hromatographed on silikagel column by using chloroform- ethanol-ammonia (60:30:0.5) solvent mixture at 1.1 mL/min low rate. The excitation and emission wavelengths of luorimetric detector were 470 nm and 520 nm, respectively, he correlation between the peak areas and the concentrations of etilmicine were observed to be linear over the concentration ange of 3.3-49.9 ng/10 /iL.- 52 - The developed HPLC method was applied to the determination f netilmicine sulphate in injectable preparations. The results ere compared statistically with those obtained by the official ethod using t- and F- tests. There was no significant ifference between the proposed method and the official method ith respect to mean values and standard deviations at 95 % onfidence level. The developed HPLC method was also applied to the etermination of netilmicine sulphate in plasma. Recovery of etilmicine from plasma was determined to be 84.1 %. After a ingle intramuscular administration of 150 mg of netilmicine to healthy volunteer, a maximum plasma concentration of 9.4 g/mL (Cmax) was reached in 1 hour (tmax). The half life of the rug was 2.27 hours (t^).