Schizosaccharomyces pombede 2-deoksitimidin 5-monofosfat mutantlarının izolasyonuna ilişkin çalışmalar

Abstract

ÖZET Ökaryotların genetiği ve moleküler biyolojisinin araştırılmasında, bir model organizma olarak kullanılan Schizosaccharomyces pombe maya türünde ilk kez dTMP oksotrof mutantlarının izolasyonunu amaçlayan bir çalışma gerçekleştirildi. S. pombe'nin yabani ırkı dTMP'ye geçirgen olmadığı için, ilk aşamada sulfanilamid, aminopterin, adenin ve dTMP içeren seçici besiortamında dTMP'ye geçirgen ırklar elde edildi. Bu ırkların sadece aminopterin ve sulfanilamid içeren besiortamındaki üremelerine göre, bu inhibitörlere dirençli tipler ayrıldı. Aynı zamanda, fermentasyonu yapılamayan bir karbon kaynağı olan, gliserin içeren bir besiortamı kullanılarak solunum kusurlu tipler belirlendi. Sonuçta, solunum kusurlu olmayan ve dTMP'ye geçirgen üç ırk (tmp14, tmp20, tmp40) seçildi. Bu ırklarda, komplemantasyon analizi ile, geçirgenliğin resesif bir karekter olduğu ve üç ırktaki değişmenin farklı komplemantasyon gruplarında bulunduğu saptandı. Geçirgen ırkların değişik sıcaklık derecelerindeki (25, 30, 35 ve 39°C) üremeleri spektrofotometrik ölçümlerle gözlendi. 39°C'nin yabani ırka benzer şekilde tüm geçirgen ırklar için, 25°C'nin ise özellikle tmp14 ırkı için uygun olmayan bir üreme koşulu olduğu belirlendi. ikinci aşamada, mutagen olarak MNNG (0.02 mg/ml) kullanılarak tmp20 ırkında mutagenez gerçekleştirildi. Sulfanilamid, aminopterin ve dTMP içeren seçici bir besiortamında üreyebilen iki olası dTMP oksotrof mutantı (thy 1 15, thyİ4s) belirlendi. Bu mutantlarda da oksotrofluğun resesif özellikte olduğu ve iki mutanttaki değişimin farklı komplemantasyon gruplarına ait olduğu saptandı. 46

SUMMARY STUDIES ON ISOLATION OF 2'-DEOXYTHYMIDINE 5'-MONOPHOSPHATE MUTANTS IN SCHIZOSACCHAROMYCES POMBE A study was performed, for the first time, about isolation of dTMP auxotrophic mutants in Schizosaccharomyces pombe yeast strain as a model organism for investigating of genetic and molecular biology of eukaryotes. Since the wild type of S. pombe is not permeable to dTMP nucleotide, as a first step, permeable strains to dTMP were obtained in a selective medium containing sulfanilamide, aminopterin, adenine and dTMP. According to growth of these strains in a medium containing only sulfanilamide and aminopterin resistant types to these inhibitors were eliminated. At the same time, respiratory deficient types were determined using a medium containing a non-fermentable carbon source glycerol. Subsequently, three strains (tmp14, tmp20, tmp40) which are permeable to dTMP and are not respiratory deficient were selected. It was determined that permeability is a recessive feature and variations in three permeable strains are in different complementation groups according the results of complementation analysis. Growth characteristics of these strains in different temperature degrees (25, 30, 35 and 39°C) were observed by spectrophotometric measurements. It was found that 39°C for all of permeable strains like wild type and 25°C for only for tmp14 strain were not suitable for growth. In the second step, mutagenesis in tmp20 strain was done using MNNG (0.02 mg/ ml). Two potential dTMP auxotrophic mutants (thy1 15. thy>48) were isolated according to their growth on selective a medium containing sulfanilamide, aminopterin and dTMP. It was also determined that auxotrophy is a recessive feature and variations in these mutants are in different complementation groups. 47