Laboratuvar ortamında aflatoxin üretimi ve aspergillus sp`nin plasmid transferine etkisinin araştırılması

Abstract

35 6. ÖZET Aflatoksinler son yıllarda mantarların neden olduğu hastalıklarda esas etkenin bunların ürettikleri bazı toksinler olduğunun anlaşılmasından sonra, ilgileri üzerinde toplamış ve özellikle Aspergillus flavus ile Asper gillus paraticus tarafından üretilen toksinlerdir. Çalışmanın ilk bölümünde laboratuvar şartlarında Aspergill uslar değişik mantarlar arasından izole edilmiş ve çoğaltılmışlardır. Daha sonra değişik, ortam koşullarında, Aspergillusların Czapek dox besi ortamında max. aflatoksin üretiminin ulaşıldığı süre saptanmıştır. Bu amaçla değişken olan rutubet, ortam ısısı PH gibi faktörlere bağlı olarak, saptanabilir aflatoksin düzeyinin sağlandığı süre araştırılmıştır. Başlangıçda, adi jelos üzerinde contaminant olarak üremiş çeşitli mantarlar arasından Aspergillus olarak identifize edilmiş bir koloniden alman örnekler, Czapek dox ağarına yayılmış ve oluşan kolonilerden sıvı Czapek dox besiyerine pasaj yapılarak çoğaltılmışlardır. Aflatoksin tesbitinde yarı kanitatif olarak sonuç veren, Total Aflatoksin Test Kits (Oxoid TD100) ile AOAC-1980 26.003 BF extraction metodu İnce Tabaka Kromatografisi uygulanarak kullanılmıştır. 15 'er gün aralıklarla 60 gün aflatoksin aranan besi ortaml arınca ikinci 15 günlük devirde (onsekizinci günde) oda sıcaklıklığında bekletilir, numunelerden bir tanesinde aflatoksin tesbit edilmiştir. Deneyler süresince testlerin yapıldığı laboratuvarda ortalama % 70 nem ve 35°C sıcaklık hakim olmuştur. Aspergilluslar ilk 24-36 saatlik-: sürede belli bir üreme yoğunluğuna erişmiş daha sonra saptanabilir aflatoksin düzeyine onsekizinci günde ulaşılmıştır. Vizuel olarak PH`ı 7.5 olan ortamda Aspergillusların, PH'ı düşük tutulan besi ortamına kıyasla daha fazla üredikleri görülmüştür. Mantarların son derece basit koşullarda üreyip, gelişerek mimikotoksin üretebilme yeteneğinde olmaları, potansiyel bir tarımsal problem olmakla beraber sağlık sorunları da yaratabilmektedir. Bundan hareketle, çalışmamızın ikinci bölümünde, mantar üretimine zemin hazırlayan bir ortamda, bakterilerin dirençlilik aktarımında olabilecek değişiklikleri incelemek amacı ile konju-36 gasyon. çalışmaları yapılmış ve Ent 8 donor, K 14-recipent suşları arasındaki konjugasyona Aspergillusların ilavesi ile yapılan denemelerde Aspergillusların konjugasyonu teşvik ettiği yorumuna varılmıştır. Çukurova bölgesinde muhtelif numune ve karma hayvan yemlerinde aflatoksin aranmış ve toplam 60 numuneden dördünde aflatoksin kalıntısı tesbit edilmiştir. Bunlar; 3.129 ug/kg Af. B1 Bademde, 0.7824 Ug/kg yerfıs- tığında, 1.564 ug/kg mısırda, 1.956 ug/kg kullanıma hazır karma hayvan ye minde olmak üzere dağılım göstermiştir.

37 SUMMARY Interest has been fodused on Aflatoxins produced especially by Aspergillusus flavus and Aspergillusus Parasiticus after finding out that the cause for the illnesses developed by fungi are their toxins. In this study, Aspergillusus were isolated from different species of fungi and were reproduced under laboratory conditiens. The time period for maximum aflatoxin production by Aspergillusus on the Czapek dox media was established under varying medium conditions. Time period taken for the production of dedetable aflatoxin levels were determined under varying levels of PH, temperature and humidity. Various species of fungi have been reproduced as contaminant on the `Adi Culture Media`. After identification, Aspergillusus have been reproduced on the Czapek dox media. Aflatoxin levels were determined by semi-guantitative Total Afla toxin Test Kit (TOlOO-Oxoid) and guantıtative AOAC-1980 BF extraction method using thin layer cromatograpy. During the 60 days period of experients aflatoxin was first detected in the media on the 18th day in only one sample that was kept at room tempera ture. The humidity and the temperature of the laboratory 70 % and 35°C respectively. Reproduction of Aspergillusus in the first 24-36 hours reached to an optimum level, dedetable levels of Aflatoxin were found after the 18th day. (^>2^g/kg.) Fungi can grow under various enviromental conditions ar.d most of them have got the cabability of producing mycotoxin. So, they can create health and agricultural problems. Aflaatoxin is a very important mycotoxin andbasicly it is produced by fungi called A. flavus and A. parasiticus. Since, the aim of our study, was to determine the effects of media, suitable for production of fungi, on conjugation (Transfer of resistance) When Aspergillusus were added to the conjugation media their encouraging effects were shown.38 Levels of aflatoxin were also investigated in some foods materials obtained from various parts of Çukurova region Aflatoxin B was found in four samples out of sixty materials analysed. Aflatoxin residues were not found in macaroni and flour samples. Aflatoxin B residue was found 3.129 >'g/kg in one of ten almonds, 0.7824 Lg/kg in one of ten ground-nuts, 1.564 ig/kg in one of ten maizes, 1.956 Lg/kg in one of ten feeds.