Genetik mühendisliği teknikleri ile yem katkısı kanatlı probiyotiklerinin oluşturulması

Abstract

öz YÜKSEK LİSANS TEZİ GENETİK MÜHENDİSLİĞİ TEKNİKLERİ İLE YEM KATKISI KANATLI PROBİYOTİKLERİNİN OLUŞTURULMASI MELTEM AŞAN Çukurova Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Zootekni Anabilim Dalı Danışman: Doç. Dr. Numan ÖZCAN Yıl: 2002, Sayfa: 77 Jüri: Doç. Dr. Numan ÖZCAN Prof. Dr. Hasan Rüştü KUTLU Yrd. Doç. Dr. Mehmet Sait EKÎNCÎ Lactobacillus acidophilus A-161 bakterisine ait içerisinde karışık bağlı p(l,3- l,4>glukanaz geni de taşıyan bir entegrasyon vektörü (pLAİL) geliştirilmiştir: Lactobacillus acidophilus A-161 genomuna ait 3 kb büyüklüğünde rastgele bir EcoRI-EcoRI fragmenti bir Escherichia coli replikatif vektörü olan pBR325 plazmidinin Kloramfenikol direnç geni içerisine takılarak pLAl entegratif plazmidi oluşturulmuştur. Buna ilave olarak, pL1Hc plazmidi üzerinde bulunan bir rumen bakterisi olan Streptococcus bovis JBl'e ait P(l,3-l,4)-glukanaz enzimim* kodlayan 1,8 kb büyüklüğündeki HindlH-BamHI DNA parçası pLAl vektörünün Tetrasiklin direnç geni bölgesine transfer edilerek pLAİL vektörü oluşturulmuştur. Bu vektör, muhtemelen tam olarak optimize edilememiş elektrotransformasyon koşullan nedeniyle Lactobacillus acidophilus A-161'in kromozomuna entegre edilememiştir. Escherichia coli I Streptococcus mekik vektörü pTRWIO ve karışık bağlı P(l,3-l,4>glukanaz geninden oluşan TLIR vektörü Streptococcus thermophilus FI8976 ve Lactococcus lactis IL1403 suşlanna elektrotransformasyonla aktarılarak bu enzimin üretimi başarıyla gerçekleştirilmiştir. SDS-Likenan-PAGE jellerin incelenmesi sonucu 26 kDa'luk enzim proteinine ait herhangi bir proteazla parçalanma belirtisi göstermediği gözlenmiştir. Anahtar Kelimeler: Laktik Asit Bakterileri, Probiyotik, Beta-glukanaz, Sub- klonlama

ABSTRACT MSc THESIS CONSTRUCTION OF FEED ADDITIVE PROBIOTICS FOR POULTRY BY USING GENETIC ENGINEERING TECHNIQUES MELTEM AŞAN DEPARTMENT OF ANIMAL SCIENCE INSTITUTE OF NATUREL AND APPLIED SCIENCES UNIVERSITY OF ÇUKUROVA Supervisor: Doç. Dr. NUMAN ÖZCAN Year: 2002, Pages: 77 Jüri: Doç. Dr. Numan ÖZCAN Prof. Dr. Hasan Rüştü KUTLU Yrd. Doç. Dr. Mehmet Sait EKİNCİ An integration vector (pLAlL) of Lactobacillus acidophilus A-161 carrying mixed linkage p(l,3-l,4)-glucanase were developed. 3 kbp EcoRI-EcoRI random fragment of Lactobacillus acidophilus A-161 genome were cloned in CMoramphenicol resistant gene oî m Escherichia coli replicative vector of pBR325 to construct pLAl integrative plasmid. In addition, 1,8 kbp Hindm-BamHI fragment of a rumen bacterium Streptococcus bovis JB1 encoding 3(l,3-l,4>glucanase enzyme, located in pLIHc vector, were transferred into Tetracycline resistance gene of pLAl to create pLAlL. Probably, because of unoptimized electroporation conditions, it could not integrated into Lactobacillus acidophilus A-161 choromosome by electrotransformation. TL1R construct, consisted of Escherichia coli I Streptococcus shuttle vector pTRWIO and mixed linkage 0(l,3-l,4)-glucanase gene, was succesfully electrotransformed and expressed into Streptococcus thermophilus FI8976 and in Lactococcus lactis IL1403 strains. SDS-Lichenan-PAGE jels showed no sing of protease degredation, in both strains of 26 kDa enzyme protein. Key Words: Lactic Acid Bacteria, Probiotics, Beta-glucanase, Subcloning rf<*