Virüslere dayanıklı (ZYMV, CMV) transgenik petunya bitkilerinin geliştirilmesi

Abstract

oz YÜKSEK LİSANS TEZİ VİRÜSLERE DAYANIKLI (ZYMV, CMV) TRANSGENIK PETUNYA BİTKİLERİNİN GELİŞTİRİLMESİ Emre KÜKÜRT ÇUKUROVA ÜNİVERSİTESİ FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ BAHÇE BİTKİLERİ ANABİLİM DALI Danışman Jüri Yrd.Doç..Dr. Yeşim YALCIN MENDİ Dr. Victor GABA Yıl: 2004, Page:81 Yard. Doç.. Dr. Yeşim YALÇIN MENDÎ Doç.. Dr. Mukaddes KAYIM Prof. Dr. M. Selim ÇETİNER Bu araştırmada, Türkiye'de ekonomik önemi olan Solanecea grubu bitkileri için model bitki Petunya'ya, ZYMV ve CMV kılıf protein geninin antisens RNA'sı ve tekrar dizinleri aktarılarak virüslere daynıklılık mekanizması incelenmiştir. Petunya bitkisi için CMV ve ZYMV virüslerinin kılıf protein genleri aktarılmıştır.Bu çalışmada oluşturulan ZYMV ve CMV viral RNA'lann, direk, mekanik ve agrobakteriyum yöntemleri kullanılarak aşılamaları yapılmıştır. Petunya bitkilerinde ZYMV ve CMV virüs kılıf protein geni kullanılarak yapılan virüs aşılamaları sonucunda, sırasıyla % 90 ve % 70 oranında başarılı sonuçlar elde edilmiştir. dsRNA ile oluşan bu transkripsiyon sonucunda, virüsün hedeflenen RNA'sım susturan genin çalıştığı gösterilmiştir. Virüslerde tekrarlanan dsRNA, virüs enfeksiyonlarının susturulmasını sağlamıştır. Buna ek olarak, virüsten ari 170 petunya bitkisi elde edilmiştir. Transformasyonda kullanılan vektör plazmidi NPT II, GUS-intron Genlerini kodlamaktadır.Elde edilen transgenik olduğu varsayılan petunya bitkilerinde yapılan GUS analizi sc-nucunda tüm bitkilerin GUS + sonuç verdiği saptanmıştır. Anahtar Kelimeler: Virüs,, petunya, ZYMV, CMV, transformasyon

ABSTRACT MSc THESIS TRANGENIC PETUNIA PLANTS IMPROVE RESISTANCE TO VIRUSES (ZYMV, CMV) Emre KÜKÜRT DEPARTMENT OF HORTICULTURE INSTITUTE OF NATURAL AND APPLIED SCIENCE UNIVERSITY OF ÇUKUROVA Supervisor : Assist. Prof.Dr. Yeşim YALCIN MENDÎ : Dr. Victor GABA : Year: 2004, Pages:81 Jury : Assist. Prof. Dr. Yeşim YALÇIN MENDİ : Assoc. Prof. Dr. Mukaddes KAYIM : Prof. Dr. M. Selim ÇETİNER Different methods are used to get virus resistant plant in genetic engineering studies.To get resistant depends on virus coat protein, virus coat protein gene antisence RNA which blocks the synthesis of virus coat protein gene and virus replicase genes is used. In this study, ZYMV (Zuccini Yellow Mosaic Virus ), CMV (Cucumber Mosaic Virus) coat protein gene, antisense RNA and repeated sequences of the gene were transferred to Petunia which has economic importance in Turkey to search virus resistant mechanism in Solanecea species. In the frame work of a study aimed at producing transgenic petunia resistance to virus associated with replicase complex, the structural (coat protein, CP) and antisence RNA genes of petunia viruses CMV and ZYMV were first inoculated in to petunia transgenic model plants analyzed. In this study, we showed that dsRNA derived from viral sequences could interface with virus infection in a squence-specific manner by directly delivering dsRNA to leaf cell either by mecanic inoculation or via Agrobacterium-m.edia.ted transient-expression assay. We have succesfully interferred with the infection of plant by the two viruses ZYMV %90 and CMV %70 demostrating the reliability of approach. Our result showed that a dsRNA intermediate in virus replication acted as efficient initiator of posttranscriptional gene silencing (PTGS) in natural virus infections, triggering the initiation step of PTGS that targets viral RNA for degradation. Additonaly, virus resistance 170 petunia plants was developed. A binary vector is encoding the NPT II, GUS- intron marker gene.All plants conrol with PCR for expression of the GUS-intron gene, PCR detection of trangene. All transgenic plants 100 % GUS test were positive. Key Words: Virus reisitant, petunia, ZYMV, CMV II