Beyaz kiraz meyvesi (Starks gold) polifenol oksidaz enziminin karakterizasyonu

Abstract

Bu çalışmada, Konya'nın Ereğli ilçesinde yetiştirilen beyaz kirazdan izole edilen ve kısmen saflaştırılan polifenol oksidaz enziminin (PFO) optimum sıcaklık, optimum pH, termal inaktivasyon, kinetik parametreler ve inhibitörlerin etkisi gibi biyokimyasal özellikleri araştırılmıştır.Saflaştırma sonucu iki ayrı aktivite piki elde edilmiştir. İlk aktivite görülen pik izoenzim A, diğeri ise izoenzim B şeklinde isimlendirilmiştir. İzoenzim A % 48.7 verimle 3.9 kat, izoenzim B ise % 54.3 verimle 76.7 kat saflaştırılmıştır. PFO enziminin optimum pH değeri A izoformu için 4.5, B izoformu için 4.98 olarak bulunmuştur. Optimum sıcaklık çalışmalarında A enziminin optimum sıcaklığının 20°C ve B enzimin optimum sıcaklığının ise 30oC olduğu saptanmıştır. İzoenzim B'nin kateşole ilgisinin izoenzim A'dan daha fazla olduğu bulunmuştur. Enzimlerin aktivasyon enerjisi Z ve (Ea) değerleri sırasıyla, A enzimi için 22.1°C (r²=0.8832) ve 98.5 kj.mol-1 (r²=0.8776) ve B enzimi için ise 13.9°C (r²=0.9903) ve 157.1 kj.mol-1 (r²=0.9886) olarak bulunmuştur. İnhibitör olarak L-sistein ve Sodyum disülfit kullanılmış ve denenen inhibitörlerin inhibisyon etkilerinin her iki enzim için farklılık gösterdiği ve B enzimini her iki inhibitörün 1.00 mM konsantrasyonda % 100 inhibe ettiği bulunmuştur.

This research was undertaken to determine some of the biochemical properties (optimum pH, optimum temperature, heat inactivation, kinetic parameters and effect of inhibitors) of polyphenol oxidase (PPO) which was isolated from white cherry grown in Ereğli/Konya and partially purified.The enzyme showed two peaks with PPO activity, which were denoted as isoenzyme A and isoenzyme B. The isoenzyme A and isoenzyme B were purified 3.9 fold with a recovery of 48.7% and 76.7 fold with a recovery of 54.3%, respectively. The optimum pH value for isoenzyme A was 4.5 and 4.98 for isoenzyme B. The temperature optima for enzyme activity were found to be 20°C for isoenzyme A and 30°C for isoenzyme B. The affinity of isoenzyme B for catechol as substrate was higher than that of isoenzyme A. Activation energies(Ea) and Z values were 22.1°C (r²=0.8832) and 98.5 kj.mol-1 (r²=0.8776) for isoenzyme A and 13.9°C (r²=0.9903) and 157.1 kj.mol-1 (r²=0.9886) for isoenzyme B, respectively. L-cysteine and sodium disulphide were used as inhibitors. It was found that the effects of the inhibitors differed from each other and both inhibitors inhibited both isoenzymes 100% at 1.00 mM.