Deneysel nekrotizan enterokolit modelinde amnion sıvısı ve sitokinlerin nekrotizan enterokolit ile ilişkisi

Abstract

Nekrotizan enterokolit (NEK) prematür bebekleri ve yenidoğanları etkileyen,gastrointestinal sistemin ciddi bir hastalığıdır. Son yıllarda in-vitro fertilizasyonyöntemlerinin gelişmesiyle preterm doğumlarla birlikte bu hastalığın da sıklığı artmıştır.Patogenezi yeterince bilinmemektedir, ancak enteral beslenme, bakteriyel kolonizasyon,prematürite, düşük doğum ağırlığı ve hipoksik-iskemik durumlar şüphelenilen riskfaktörleridir. Fetal dönemde bu faktörlere maruz kalınsa da yutulan amnion sıvısınınönleyici rolü ile bebekler NEK?ten korunmakta, NEK bulguları görülmemektedir. Bunagöre, gastrointestinal sistem gelişiminde etkileri olan amnion sıvısının deneysel NEKmodelinde etkilerini incelemeyi planladık. Bu amaçla, sıçan yavruları hipoksi-hipotermigeliştirilen modele göre 5 gruba ayrıldı. Grupların dördüne hipoksi-hipotermi uygulandıve anne sütü ile beslenen (G2), amnion sıvısı ile beslenen (G3), formula ile beslenen(G4), amnion sıvısı ile hazırlanan formula ile beslenen (G5) gruplar kontrol grubu (G1)ile kıyaslandı.Deneyin 96. saatinde tüm hayvanlar ?sakrifiye? edildi ve çalışma sonlandırıldı.Histopatolojik inceleme için bağırsak örnekleri alındı ve kalan bağırsak kısımlarındandoku homojenatı elde edildi. Homojenat örneklerinden sekonder enfeksiyonlarınincelenmesi için CRP, oksidan-antioksidan stres için MDA, SOD, CAT ve GPx,enflamasyon için GM-CSF, TNF-?, IL-8 ve vasküler hasarın tespiti için VEGF ve ET-1düzeyleri değerlendirildi.Hipoksi-hipotermi stresi uygulanan ve anne sütü ile beslenen yavrularda (G2)NEK gelişimine ait bulgular ve perforasyon gözlemlenmedi. Bu durum anne sütününkoruyucu etkisine bağlandı. Ancak, diğer gruplarda perforasyon ve NEK bulgularıgelişti. Amnion sıvısı ile beslenen yavruların (G3) formula mama ile beslenenlerdendaha kısa yaşadığı tespit edildi. Azalmış bu yaşam süresi amnion sıvısının düşük enerjive protein içermesine bağlandı, intestinal perforasyon ise G4 yarvularına göre dahaseyrek saptandı. Bununla birlikte G4 yavrularında perforasyon daha sıktı ve NEKbulguları daha şiddetli idi. Bu değişiklikler amnion sıvısının bağırsak lümenindemukosiliyer bariyeri koruyucu rol oynaması, oksidatif stresi azaltması, antioksidangörev yapması, enflamasyonu azaltması ve vaskulogenezisi etkileyerek remodelingiartırması ile düşük solüt yüküne bağlandı.ixSonuç olarak bu çalışmada, enerji ve protein içeriğinden fakir olan anmionsıvısının formula mama ile birlikte yenidoğan sıçanlara verilmesiyle bağırsakperforasyonu ve NEK gelişim sıklığının azaldığını gösterdik. Amnion sıvısının formulamama ile verilebilmesi için steril olarak toplanması, mikrobiyal ajanlar ve vernikskazeozadan arındırılması ve her yenidoğanın kendi amnion sıvısının muhafaza edilmesive daha kapsamlı çalışmalara ihtiyaç vardır.

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a serious disease that effects gastrointestinaltract of premature infants and newborns. During the recent years, the development of invitrofertilizastion methods caused preterm birth frequency and disease rate. Thepathogenesis of this disease is not known enough, however as risk factors for thedisease are enteral nutrition, bacterial colonization, prematurity, low birth weight, andhypoxic-ischemic conditions are suspected risk factors. Despite exposure to thesefactors in the fetal period the NEC signs are not seen because the swallowed amnioticfluid has a preventive role and protects the baby from NEC. Beside this, it causes ofgastiontestinal tract development and we aimed to investigate the effects of amnioticfluid on experimental NEC model. For this purpose, 5 groups of rat pups wereexamined by hypothermia-hypoxia developed model. Four groups of newborn rats wereexposed to hypothermia-hypoxia and were fed with breast milk (G2), amniotic fluid(G3), formula (G4), prepared with amniotic fluid formula (G5) and were compared withcontrol groups (G1).At the 96th hour of the experiment model all animals were sacrified and thestudy was terminated. A intestinal sample was taken for histopathologic examinationand the remaining segment of the intestine was homogenated. The homogenatedsamples were examined for secondary infections by CRP, for oxidative-antioxidativestress by MDA, SOD, CAT and GPx, for inflammation by GM-CSF, TNF-?, IL-8 andfor vascular damage evaluation by VEGF and ET-1 levels analyzes.There weren?t NEC devolopment signs and perforation findings at hypoxichypothermicstress induced and breast fed pups (G2). This conditon was connected toprotective effect of breastfeeding. However, perforation and necrotising enterocolitissigns developed in the other groups. It was noticed that amniotic fluid fed pups (G3)lived shorter than formula fed pups (G4). This short life span was connected to lowenergy and protein content of amniotic fluid but the intestinal perforation rate was lowerthan G4 pups?. In addition, the NEC signs of G3 were less and were not as severe asG4?s. However, more perforation was observed in G4 pups and NEC findings were moreserious. When the pups were fed by the formula mixtured with amnion fluid (G5)theintestinal perforation rate decreased and NEC findings weren?t severe as G4. Thesexichanges connected to amniotic fluid protecting role of mucociliary barrier at bowellumen, reduced oxidative stres, perform antioxidant tasks, reduce inflammation andincrease remodeling by affecting the vasculogenesis with low solute load.As a result of this study, we showed that poor energy and protein contentamniotic fluid used combined with formula feeding newborn rats reduced bowelperforation and NEC development rate. For using amniotic fluid combined withformula, amniotic fluid should be sterile collected, seperated from microbial agents andvernix caseosa and kept its own amniotic fluid of each newborns, and more extensivestudies are needed.