Renal iskemi reperfüzyon hasarının önlenmesinde epigallokateşin-3-gallat ve quercetin antioksidanları`nın koruyucu etkilerinin araştırılması

Abstract

ÖZETBöbrek iskemisi durumu, abdominal aorta yönelik cerrahilerde suprarenal klempaj sonrası, kısmi nefrektomi (böbrek alımı), böbrek transplantasyonu, sepsis (bakteri veya diğer patojenlerin kan dolaşımına geçmesi), çeşitli ürolojik müdahaleler ve hidronefrozis gibi çeşitli klinik durumlarda görülür.Biz bu çalışmamızda daha önceden de İ/R hasarına etkileri araştırılmış olan antioksidanlardan Epigallokateşin-3-gallat (EGCG) ve Quercetinin (Q) ayrı ayrı ve birlikte, renal iskemi-reperfüzyon hasarı üzerine etkilerini araştırmayı amaçladık. Çalışmada Wistar Albino türü 40 adet erkek sıçan kullanıldı. Sıçanlar sham grubu, kontrol (iskemi reperfüzyon (İ/R)) grubu, İ/R'dan 15 dk önce verilen Q grubu, EGCG grubu ve bu etkenlerin birlikte verildiği EGCG+Q (kombine) grup olarak 5 gruba ayrıldı. Sham grubundaki sıçanlara sadece laparotomi yapıldı ve 120 dk beklendi, kontrol grubuna (İ/R) 60 dk iskemi sonrası 60 dk reperfüzyon uygulandı. Ayrıca sham ve kontrol grubuna laparotomiden 15 dk önce 50 mg/kg serum fizyolojik intraperitoneal olarak verildi. EGCG, Q ve kombine (EGCG+Q) gruplara ise İ/R dan 15 dk önce bu etken maddeler intraperitoneal olarak verildi ve 60 dk iskemi ve 60 dk reperfüzyon gerçekleştirildi. Reperfüzyon sonrasında yüksek doz anestezik madde verilerek öldürülen sıçanlardan böbrek dokusu alındı. Alınan örneklerden biyokimyasal olarak lipid peroksit ürünü olan Malondialdehit (MDA) düzeyleri ve enzimatik savunma sistemlerinden Süperoksit dismutaz (SOD), Glutatyon peroksidaz (GSH-Px), Katalaz (CAT) aktiviteleri ölçüldü. Dokularda histopatolojik inceleme yapıldı. Sonuçlar birbirleriyle istatistiksel olarak karşılaştırıldı.Biyokimyasal analiz sonunda deney kontrol grubu (İ/R) MDA düzeyi ilaç verilen gruplara oranla anlamlı olarak yüksek bulunmuştur (p<0.05). SOD enzim aktivitesi açısından en yüksek değerlerin ilaç verdiğimiz gruplarda anlamlı şekilde yüksek çıktığı görülmüştür (p<0.05). Ortalama SOD değerlerini hesapladığımızda en düşük değerin deney kontrol (İ/R) grubunda olduğu en yüksek değerin ise EGCG+Q (kombine) grubunda olduğu görülmüştür. Bu bilgiler ışığında, SOD aktivitesinin artışı hasar sırasında oluşan serbest radikallere karşı bir savunma mekanizmasının oluşturulduğunu göstermektedir.Katalaz ve GSH-Px enzim düzeylerine baktığımızda deney kontrol grubundaki CAT ve GSH-Px düzeyi ilaç verilen gruplara oranla anlamlı olarak düşük bulunmuştur (p<0.05). Bu oran kombine (EGCG+Q) grubun GSH-Px enzim aktivitesinde daha belirgin ve anlamlı şekilde görülürken, CAT aktivitesinde ise kontrol grubuna göre belirgin bir fark olmadığı tespit edilmiştir (p>0.05).Bu sonuçlar uyguladığımız modelde böbrek İ/R hasarı oluştuğunu göstermektedir. İ/R hasarı sonrası oluşan oksidatif hasarı ortadan kaldırmaya çalışan ajan ve antioksidan enzimlerden SOD ve GSH-Px enzimi aktivitesi ise ilaç verdiğimiz gruplarda, kontrol (İ/R) grubuna göre anlamlı olarak yüksek bulunmuştur (p<0,05). Bu bulgulardan yola çıkılarak kullandığımız EGCG, Q ve bunların kombine uygulanışının böbrek İ/R hasarına karşı koruyucu etkilerinin olabileceği anlaşılmaktadır. Bu konuda farklı süre ve doz çalışmalarının yapılmasının konunun aydınlatılması açısından faydalı olacağı kanısına varılmıştır.Anahtar Kelimeler: İskemi reperfüzyon, sıçan, EGCG, Q, malondialdehit, süperoksit dismutaz, katalaz ve glutatyon peroksidaz.

ABSTRACTThe situation of renal ischemia is seen at clinical situations such as klempaj suprarenal abdominal aorta after surgery for partial nephrectomy (renal uptake), renal transplantation, sepsis (bacteria or other pathogens, to pass into the bloodstream), various urological interventions, and hydronephrosis.In this study, it is aimed to examine the effect of the antioxidant epigallocatechin -3-gallat (EGCG) and Quercetinin (Q) together and separately on renal ischemia-reperfusion injury, which were previously studied on the effects of I/R injury. In the study, 40 male rats of Wistar Albino type are used. The rats are divided into five groups as control group (renal ischemia-reperfusion (I/R)), Q group given 15 minutes after I/R, EGCG group and combined group that is given these factors together.Sham rats were subjected to laparotomy, and 120 min was waited, control group is subjected to 60 min. Reperfusion after 60 minutes of ischemia, and also sham and control (I/R) groups are given 50 mg/kg intraperitonel saline after laparotomy.EGCG, Q and combined groups are given these active ingredient in intraperitoneal after I/R and 60 minutes of ischemia and 60 minutes of reperfusion is carried out.After reperfusion, renal tissue was taken from killed rats given a high dose of anesthetic agent. The biochemical product of lipid peroxide malondialdehyde (MDA) levels and enzymatic defense systems in the superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSH-Px), catalase (CAT) activities were measured from the samples. Tissues were examined histopathologically. Results were statistically compared with each other. Biochemical analysis of the drug in the experimental groups compared with the control group were significantly higher MDA levels (p <0.05). The highest values of SOD activity was significantly higher in groups where drugs were given (p <0.05). Estimating the average values of SOD, the lowest value is in the experimental control (I / R) group and the highest figure is in EGCG + Q (combined) group. In light of these findings, it shows that increase in SOD activity puts up a defense mechanism against free radicals generated during damage.Looking at the experimental levels of catalase and GSH-Px, CAT and GSH-Px levels in the control group were significantly lower than in groups given the drug (p <0.05). This ratio is seen at (EGCG + Q) group significantly more noticeable and meaningful at GSH-Px enzyme activity, while there was no significant difference at CAT activity than the control group, (p> 0.05).These results show that renal I / R injury have occurred in applied model. Activities of agent and the antioxidant enzymes SOD and GSH-Px enzyme that attempts to eliminate the oxidative damage were significantly higher in drug given groups than control (I / R) group (p <0.05). Based on these findings, used EGCG, Q, and their implementation of the combined renal I / R are understood that can have protective effects against oxidative damage. It is concluded that different duration and dose studies will be useful to clarify the issue.Key words: Ischemia-reperfusion, rats, EGCG, Q, malondialdehyde, superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase.