Yurtdışından yeni getirilen turunçgil üretim materyallerinin tristeza ve spiroplasma citri yönünden serolojik ve moleküler yöntemlerle testlenmesi

Abstract

Bu çalışma, Çukurova Üniversitesi Subtropik Meyveler Araştırma ve Uygulama Merkezi Seralarında kontrollü koşullarda bulunan, yurt dışından üretime yönelik olarak getirtilmiş turunçgil üretim materyallerinden, 6 portakal, 6 mandarin, 5 altıntop ve 6 limon çeşidinin virüs (Tristeza) ve Spiroplasma (Spiroplasma citri) yönünden serolojik ve moleküler yöntemlerle testlenmesi amacıyla 2009?2010 yılları arasında yürütülmüştür.Çalışmalarda kullanılan üretim materyalleri DAS-ELISA yöntemi ile testlenmiş ve pozitif kontrol amaçlı kullanılan bitkiler hariç, negatif kontrol bitkilerinde ve diğer üretim materyallerinde Tristeza ve Spiroplasma citri infeksiyonlarına rastlanmamıştır.PCR çalışmalarında, CTV1 ve CTV10 primer çifti CTV' nin protein kılıf gen 653 bp'lik çoğaltmak amacıyla kullanılmıştır. P58-4f ve P58-4r primer çifti Stubborn' nun putative p58 adhesin-like gen 450 bp'lik mesafeleri çoğaltmak amacıyla kullanılmıştır. RT-PCR çalışması sonucunda, Tristeza için sadece pozitif kontrol olarak kullanılan 24 numaralı örnekte agaroz jel de 653 bp' lik band gözlemlenmiş ve diğer örnekler negatif olarak bulunmuştur. Stubborn için ise bütün örnekler agaroz jel de 450 bp' lik band gözlenememiştir.Bu çalışmada kullanılan çeşitlerin Tristeza ve Spiroplasma citri hastalık etmenleri ile bulaşık olmadığı serolojik ve moleküler yöntemlerle belirlenmiştir.Anahtar Kelimeler: Tristeza, Stubborn, DAS-ELISA, RT-PCR

This study was conducted on 6 oranges, 6 mandarin, 5 grapefruits and 6 lemons varieties, brought from abroad for production, maintained in greenhouses of Çukurova University, Subtropical Fruits Research and Experimental Centre. These production materials were tested in term of Tristeza ve Spiroplasma citri by serological and molecular techniques by 2009 and 2010 years.The production materials were tested by DAS-ELISA, and except positive control all samples and negative control were found negative for Tristeza and Stubborn diseases.In PCR assays, CTV1 and CTV10 primers couple were used to amplify 653 bp on coat protein gene of CTV; P58-4f and P58-4r primer couple were used to amplify 450 bp on putative p58 adhesin-like gene of Stubborn. In the result of PCR assays, 653 bp band was observed on agarose gel for only sample coded 24 number for Tristeza and remaining samples were found as negative; 450 bp bands were not observed on agarose gel for all samples for Stubborn.It was determined all of varieties used in this study are not infected with Tristeza and Stubborn by serologically and molecular techniques.Key Words: Tristeza, Stubborn, DAS-ELISA, RT-PCR