Gram negatif çomaklarda genişlemiş spektrumlu beta laktamaz üretiminin farklı yöntemlerle araştırılması ve beta laktamazların izoelektrik odaklama yöntemi ile tiplendirilmesi

Abstract

56 ÖZET Hastanemizdeki gram negatif çomaklarda Genişlemiş Spektrumlu P-laktamazlar (GSBL)'m sıklığım ve GSBL üretimini saptamada uygulanan yöntemlerin rutin kullamlabilirliğini araştırmak amacıyla bu çalışma yapılmıştır. Bir yıllık süre içerisinde klinik örneklerden izole edilen toplam 701 gram negatif çomak çift disk sinerji ve belirleyici antibiyotik duyarlılıklarına göre GSBL yönünden tarandı; pozitif ve şüpheli bulunan 80 izolat araştırma kapsamına alındı. Bu suşlarda agar dilüsyon, E test ESBL, çift disk sinerji, belirleyici antibiyotik duyarlılıkları ve Sug'lık seftazidim diski yöntemleri ile GSBL'lar araştırıldı. Uygulanan test sonuçlan birlikte değerlendirildiğinde; 33 susta GSBL varlığı saptandı. Referans agar dilüsyon yöntemine göre diğer testlerin duyarlılıkları sırasıyla; E test ESBL'nin %81, çift disk sinerji testinin %75, 5 ug'lık seftazidim diskinin %81.2, GSBL belirleyici antibiyotiklerin %56 olarak bulundu. Bu testlerin özgüllükleri ise sırasıyla; %98, %96, %58, %79 olarak saptandı. Gram negatif çomaklarda GSBL pozitifliği; Klebsiella türlerinde %49, Citrobacter türlerinde %15 (2/13), Enterobacter türlerinde %5 (4/82), ii.co/flerde %1 olarak bulundu. Hastane kaynaklı izolatlardan; Klebsiella'larda. %69, Citrobacter'letde %12, Enterobacter'lerde %8, £co/z`lerde %3 GSBL pozitifliği saptanmıştır. Pseudomonas aeruginosa suşlannda GSBL pozitifliğine rastlanmadı. Ayrıca P- laktamazlan tiplendirmek amacıyla, nitrosefinle P-laktamaz pozitif bulunan 61 suş için izoelektrik odaklama (İEF) uygulandı. Bu yöntemle 48 suşda sadece bir, 18 suşda birden fazla P-laktamaz bantı gözlenirken, bir susta enzim bantı gözlenemedi. Suşlann yirmi beşinde 5.4, 24'ünde 7.6, 8'inde 5.6, 7'sinde 7.0, 6'sında 8.2, 5'inde 7.8, 4'ünde 6.3, 2'sinde 8.4 izoelektrik noktalan saptanırken; 5.9, 6.0, 6.5, 6.9 bantlan ise birer suşda gözlendi. Yapılan değerlendirme sonucunda enzim bantı gözlenen 66 susun 33 'ünde Grup2be, 20'sinde Grup57 2b, 3'ünde Grup 1, 3'0nde Grup 2d, l'inde Grup 2f 'de yer alan enzimlerin özellikleriyle uyumlu bantlar kaydedildi. Altı suşda görülen p-laktamazlar tam olarak gruplandınlamadı. Genişlemiş Spektrumlu pMaktamaz pozitifliği en yüksek oranda Klebsiella suşlannda bulundu. Bu enzimleri üreten bakterileri saptamada, duyarlılığı düşük olmasına rağmen özgüllüğünün yüksek olması, kliniğe hızlı sonuç verilebilmesi ve kolay uygulanabilir olması nedeniyle çift disk sinerji testinin ve günlük yapılan antibiyograma fazla bir iş yükü getirmeyen belirleyici antibiyotik disklerinin birlikte rutin GSBL taramasında kullanılabileceği sonucuna varıldı.

58 SUMMARY The purpose of this study is to determine the frequency of Extended-Spectrum 3- lactamases (ESBL) production among gram negative bacteria isolated in our hospital and to asses the method that might be used its detection in routine laboratory study. A total 701 gram negative bacilli were screened for ESBL production using double disk synergy and susceptibility pattern to marker antibiotics (cefoxitin, ceftazidim, aztreonam) for one year. Of these isolates, 80 were thought to be positive for ESBL. The 80 isolates were reexamined by five methods, agar dilution, E test ESBL, double disk synergy, susceptibility to marker antibiotics and 5 u.g ceftazidim disk. The results indicated that 33 strains were true positive for ESBL. In comparision to reference agar dilution method, the sensitivity and specifity of the following methods were E test ESBL 81 %, 98 %; double disk synergy 75 %, 96 %; 5 ug ceftazidim disk 81.2 %, 58 %; susceptibility of marker antibiotics 56 %, 79 %. The frequency of ESBL production among the gram negative bacteria were 49 % Klebsiella spp, 15 % Citrobacter spp, 5 % Enterobacter spp and 1 % E.coli. For inpatent isolates, the values for above bacteria were; 69 %, 12 %, 8 %, and 3 %, respectively. All Pseudomonas aeruginosa isolates were negative for ESBL production. Using nitrocefin method, 67 of the 80 strains were found to be positive for p-lactamases and these strains were retested by isoelectric focusing (IEF) for typing of these enzymes. By this method, 48 strains yield only one band, while 18 strains had more than one band. The remain one strain did not produce any band. In 66 strains, isoelectric points (pi) were as follows 5.4 in 25 strains, 7.6 in 24 strains, 5.6 in 8 strains, 7.0 in 7 strains, 8.2 in 6 strains, 7.8 in 5 strains, 6.3 in 4 strains and 8,4 in 2 strains. Whereas each pi; 5.9, 6.0, 6.5, 6.9 was found in one strain only. According to our results the highest ratio of ESBL positivity was found among Klebsiella spp. p-lactamases observed in 66 strains were classified as follows; 33 Grup 2be,59 20 Grup 2b, 3 Grup 1, 3 Grup 2d and 1 Grup 2f. The 6 ^-lactamases can not be classified. In spite of low sensitivity of double disk synergy and susceptibility to marker antibiotics, they can be used in routine laboratory study, because of their rapid and easy performance.