Yaygın damar içi pıhtılaşması olan çocuk hastalarda trombositopeni gelişiminde trombosit aktivasyonu ve apopitozisin rolü

Abstract

ÖZET Amaç: YDİP olan çocuk hastalarda trombositoperünin gelişiminde aktivasyon ve apopitozisin rolünün belirlenmesi. Gereç ve Yöntem: Çalışma, YDİP puanlamasından 4 ve üzerinde puan alan, yaşlan 2 ay ile 13 yaş arasında değişen hastalardan alman plazma örnekleri ile yapıldı. Topken 8 sağlıklı vericinin trombositleri in vitro olarak kullanıldı. YDİP'li hastaların plazması eklenen ve eklenmeyen trombosit örnekleri 5 gün süre ile inkübe edildi. Çalışmada kullanılan floresan boyalarla (CD41, JC-1, CD62P, Annexin V, Anti-Caspase-3) boyandıktan sonra akım sitometride analiz edildi. Sonuçlan 1-YDÎP'li hastaların plazmaları eklenen ve eklenmeyen tromboşitlerin beş günlük inkübasyonu sonrasında ölçülen JC1 pozitif hücre oram istatiksel olarak anlamlı farklı saptandı, her iki grubun kaspaz 3 pozitif hücre oranlan arasında ise fark olmadığı görüldü. 2-Parsiyel tromboplastin zamanı (PTT) uzamış olan YDİP'li hastaların plazması eklenmiş olanlarla, PTT değeri nonnal YDİP'li hastaların plazması eklenmiş olanlar arasında, aktivasyon göstergelerinden annexin V pozitif hücre oranının anlamlı derecede farklı olduğu saptandı 623-Mortalite ile sonuçlanan grupta apopitozis göstergelerinden JC1 pozitif hücre oranının anlamlı derecede yüksek olduğu saptandı Tartışma' YDİP'li hastaların plazması eklenenlerde, eklenmeyenlere göre, apopitozis göstergelerindenden JC1 pozitif hücre oranında artış olması, YDÎP sürecinde trombosit apopitozisinin olabileceğini düşündürmektedir. AnnexinV pozitif hücre oranının yüksek saptanması ile apopitozis göstergeleri olan JC1 ve kaspaz 3 pozitif hücre oranının yüksekliği birliktelik göstermediğinden, kaspazdan bağımsız apopitozisin gerçekleşmiş olabileceği veya aktivasyon lehine yorumlanabilir. Hastalardan, mortalite ile seyreden grupta apopitotik göstergelerden JC1 pozitif hücre oram sağ kalanlara göre anlamlı derecede yüksek saptanması, kliniği daha ağır olan YDİP'li hastaların trombosit mitokondri membran potansiyelindeki değişikliğin daha belirgin olduğu, dolayısıyla, apopitotik aktivitenin daha belirgin olduğu şeklinde yorumlanabilir. PTT değeri yüksek olan YDİP'li hastaların plazması eklenmiş olanlarda, annexinV pozitifliği olan hücrelerin oram yüksek saptanmış olup, bu durum, sadece PTT değeri yüksek olan hastaların plazmalarında bulunan bir faktörün trombosit aktivasyonuna yol açtığını düşündürebilir. Sonuç olarak, YDÎP sürecinde trombositopeni gelişiminde, apopitozis ve apopitozis dışı mekanizmaların birlikte rol oynadığı düşünülebilir. YDİP'li hasta plazması eklenenlerde yapılan trombosit inkübasyonunda teorik olarak beklenen aktivasyon görülmemesi in vitro ortamdan kaynaklanmış olabilir. Anahtar Kelimeler: Yaygın damar içi pıhtılaşması, trombosit, çocuk, apopitozis, aktivasyon. 63

SUMMARY Purpose: To detect rae role of platelet activation and apopitotic activity in development of thrombocytopenia in DIC patients. Material and Method: The plasma of the patients aged between 2 months and 8 years with the DIC score above 4 were studied. The platelets of 8 previously healthy subjects were used in vitro. We incubated the thrombocytes challenged with either DIC patients or not for 5 days. Finally, we analyzed the specimen on flowcytometry after staining with CD41, JC-1, CD62P, Annexin V, Anti~Caspase-3. Results: 1- There was statistically significant difference regarding JC-1 positive cell ratio, whereas no significant difference regarding caspase 3 positive cell ratio between two groups. 2- One of Öıe activation parameter, annexin V positive cell number, was found to be significanfly different between the groups whose aPTT value is prolonged or not in DIC state. 3- JC-1 positive cell ratio which is a good indicator of apopitosis wa§ statistically higher in the group ended up with mortality. 64Conclusion: The increased JO (+) cell ratio* a precursor of apopitosis, in specimens which plasma of DIC patients added when compared to specimens Which not suggests platelet apopitosis may contribute DIC process. Since mere is no relation between increased annexin V (+) ceo ratio and increased JO and caspase (+) cell ratio Which are apopitosis determinants may support the idea of caspase unrelated apopitosis or on behalf of activation. The significantly increased numbers of JO positive cells in the plasma of patients ended up with mortality when compared to survivors may suggest mat the change in mitochondrial membrane potential of platelets is more significant, and therefore conclude that apopitotic activity is more abundant. There was increased number of annexin `V positive cells in specimens of patients with prolonged aPTT. This finding may imply an unknown factor in their plasma have contributed to platelet activation. As a result, development of thrombocytopenia in DIC patients probably occur due to combination of mechanisms related to apopitosis and other than apopitosis. The reason why we did not observe activation of thrombocytes in plasma of DIC patients may be due to in vitro study. Keywords: Disseminated intravascular coagulopathy, thrombocyte, child, apopitosis, activation 65