Yaş, cinsiyet ve menstruel siklusun evrelerine göre insan serumen lipid kompozisyonunun yüksek performans ince tabaka kromatografisi (HPTLC) ile araştırılması

Abstract

YAŞ, CİNSİYET VE MENSTRUEL SİKLUS EVRELERİNE GORE İNSAN SERUMEN LİPİD KOMPOZİSYONUNUN YÜKSEK PERFORMANS İNCE TABAKA KROMATOGRAFİSİ İLE ARAŞTIRILMASI ÖZET Serumen, dış kulak yolu epitel döküntüsü ve kıllar ile birlikte, serüminöz ve yağ bezlerinin sekresyonlarının kombine bir karışımıdır. Serumenin lipid içeriği, epidermis ve yağ bezleri tarafından oluşturulmaktadır. İnsan serumeninin lipid içeriği, esas olarak oluşturduğu koruyucu lipid tabaka ile dış kulak yolunun enfeksiyonlara karşı korunmasında rol oynamaktadır. Yağ bezlerinin kontrolünde, başlıca endokrin mekanizmalar rol oynar. Adroj enler, yağ bezlerinin en iyi uyaranları olarak bilinmektedir. Nonendokrin mekanizmalar da mevcut olabilir. İnsanlarda, yaş ve cinsiyete göre hormon düzeylerinde değişiklikler bildirilmiştir. Önceki çalışmalarda, yaşa ve cinsiyete göre serumenin total lipid ve total protein içeriğinin değişmediği belirtilmiştir. Bu konuda detaylı bilgilere ihtiyaç bulunmaktadır. Bu çalışmada, yüksek performans ince tabaka kromatografisi (HPTLC) ile yaş, cinsiyet ve menstruel siklus evrelerinde insan serumeninin lipid kompozisyon değişiklikleri incelendi. Her iki cinsiyette de incelenen yaş grupları şöyledir: Grup 1:1- 10 yaş, grup 2: 11-18 yaş, grup 3: 19-40 yaş ve grup 4: 40 yaş üzeri. İlave olarak menstruel sudusun üç ayrı evresinden de serumen örnekleri alındı. Toplam 242 serumen örneği analiz edildi. Serumen örnekleri, dış kulak yolundan steril bir pamuk çubuk 72yardımıyla alındı. Lipidler, hekzan/dietileter/astik asit (80/20/7, v/v/v) içerisinde ekstrakte edilerek HPTLC plakalarına tatbik edildi. HPTLC plakaları, bir dansitometrede taranarak miktar analizleri gerçekleştirildi. Her iki cinsiyetteki serumen örneklerinde, mum esterleri 1-10 yaş grubunda diğer gruplara göre anlamlı olarak yüksek bulundu. Triaçilgliserol+serbest yağ asitleri ve skualen düzeyleri, her iki cinsiyette de yaş ile birlikte artış gösterdi. Erkeklerde, 19-40 yaş grubunda serilmenin skualen içeriği, aynı yaş grubundaki kadınlara oranla anlamlı olarak yüksek iken, kolesterol içeriği düşük olarak belirlendi. Menstruel siklus evrelerinde, başlıca farklılıkların proliferatif evre ile luteal ve menstruel evreler arasında olduğu tespit edildi. 19-40 yaş arasındaki kadınların serumen örneklerinde, proliferatif evrede diğer evrelere oranla Triaçilgliserol+serbest yağ asitleri düzeyleri daha düşük, kolesterol düzeyleri daha yüksek olarak belirlendi.Sonuç olarak, serumenin lipid kompozisyonunun yaş, cinsiyet ve menstruel evrelerde değişiklikler gösterdiği, başlıca farklılıkların 1-10 yaş grubu ile diğer yaş grupları arasında oluğu anlaşılmaktadır. Endokrin mekanizmaların serumenin lipid profilinin tayininde önemli rol oynayabileceği gözlenmektedir. Serumenin, enfeksiyona karşı koruyuculuk derecesi, lipid kompozisyonu ile bağlantılı olabilir. Anahtar kelimeler: Yüksek performans ince tabaka kromatografisi, serumen, yağ bezi, lipid. 73

INVESTIGATION OF AGE, SEX AND MENSTRUEL STAGE VARIATION IN CERUMEN LIPID COMPOSITION BY HIGH PERFORMANCE THIN LAYER CHROMATOGRAPHY SUMMARY Cerumen is a mixture of desquamated keratinocytes and hair combined with the secretions of both the ceruminous and the sebaceous glands of the external auditory canal. Lipid content of the cerumen is derived from two sources, the epidermis and the sebaceous glands. T he r ole o f h uman c erumen i s b elieved top rotect t he e xternal e ar canal against infection in which its lipid content plays an essential role through forming a protective lipid film. The endocrine mechanisms play a major role in sebaceous gland control. Androgens are the best known stimulators of the sebaceous glands. Other nonendocrine mechanisms may also exist. Age and sex variation in various hormonal levels of humans are well- documented. However, previous studies indicate no age and sex-related changes in total lipid and protein content of cerumen, thus detailed information is lacking. To this end, in the current work age, sex and menstruel phase variation in human cerumen lipid composition was investigated by sequential, one dimensional High-Performance Thin Layer Chromatography. The following age groups of both sexes were investigated: Group I: Range 1-10 years, Group II: Range 11-18 years, Group III: Range 19-40 years and Group IV: over 40 years. Additionally, c erumens from three stages o f menstruel cycle were also taken. Total of 242 cerumen samples were analysed. Cerumen samples for d etermination of lipid composition w ere collected from external ear canal with a sterile cotton bud. The lipid was recovered by extraction into hexane/diethylether/acetic 74acid (80/20/7, v/v/v) and analysed by sequential, one dimensional high performance thin layer chromatography. All high performance thin layer chromatography plates were scanned with a densitometer for the quantification of the lipids. Peak values for wax esters occured in cerumen samples from both sexes between the ages 1-10. Triacylglycerol+free fatty acids and squalen content increased with age in both sexes. Males aged 19-40 had a significantly greater percentage of cerumen lipid squalen content than females from identical age group. However cholesterol content was found to be lower. In terms of menstruel cycle stages, the main difference was observed between proliferative and luteal or menstruel stages. Cerumen samples from females aged 19-40 at proliferative stage of menstruel cycle had significantly lower triacylglycerol+free fatty acids content while percentage of cholesterol being higher than those at luteal or menstruel stages. It was conclued that proportions of lipid constituents of cerumens varied with age in both sexes. Lipid composition of cerumen from the subjects aged 1-10 differed markedly from other age groups. Endocrine mechanisms appear to take an important part in the determination of the lipid profile of the cerumen. To what degree the cerumen can provide protection against infection might be related to its lipid configuration. Key words: High Performance Thin Layer Chromatography, cerumen, sebaceous gland, lipid. 75