Çukurova bölgesinde hemoglobinopatilerin HPLC yöntemleriyle incelenmesi

Abstract

ÖZ Bu çalışmada laboratuvarımıza başvuran hastalardan ve tarama çalışmalarımızdan elde edilen kan örneklerinin katyon değiştirici ve ters faz HPLC ile incelenmesi amaçlanmıştır. Çalışmamızda; 18 normal.43 şüpheli oc-tal taşıyıcı yada demir eksikliği olan bireyler, 89 p-tal taşıyıcı, 20 p-tal homozigot yada Sp-talasemik ve HPFH olduğu şüpheli bireyler, talasemik olduğu düşünülen MCV< 79 fl,HbA2 >3.7 ve HbF>2 olan 18 birey, 24 HbSS, 31 HbAS, 31 S-tal, 26 HbAE, 6 HbSE, 4 HbAD, 2 D-tal, 3 HbSD, 1 HbJ-Paris-1 ve 10 kordon kanı örneği olmak üzere normal ve çeşitli talasemik olgular ve anormal hemoglobinler olmak üzere toplam 326 olgu incelenmiştir. HPLC analizleri öncesi olguların sırasıyla Coulter analizleri, sellüioz asetat elektroforezleri yapılmış ve mikrokolon yöntemiyle HbA2 ve alkali denatürasyon yöntemiyle HbF düzeyleri belirlenmiştir. Zayıf katyon değiştirici PolyCAT-A kolonu kullanılarak yapılan katyon değiştirici HPLC ile HbF, HbA, HbA2) HbS, HbD ve HbJ Paris-1 çok iyi bir şekilde ayrılmış ve kantitasyonları yapılmıştır. C4 kolonu kullanılarak yapılan ters faz HPLC yöntemi ise normal ve anormal globin zincirlerinin saptanması ve kantitasyonlarının yapılması için idealdir. Çalışmamızda katyon değiştirici HPLC analizinde HbA2 ile birlikte elüve olan HbE' nin ayırımı ve Gy, Ayl ve AyT gibi gama zincir varyantlarının ayırımı ters faz HPLC ile tam olarak gerçekleştirilmiştir, a / non a oranlarının semi-kantitatif olarak hesaplanması ise a ya da p- talasemik durumların belirlenmesini sağlamaktadır. Anahtar kelimeler: HPLC, Katyon değiştirici, Anyon değiştirici, Anormal hemoglobinler, p- talasemi. Bu çalışma Çukurova Üniversitesi Rektörlüğü Araştırma fonunun katkılarıyla SBE-93-1 no' lu proje ile gerçekleştirilmiştir. VII

SUMMARY The aim of this study was to analyse blood samples by cation-exchange and reversed phase HPLC obtained from screening survey of hemoglobinopathies and from patients referred to our laboratory. In this proposal we analysed total 326 normal and different types of thalassemic and abnormal hemoglobins including 18 normal, 43 uncertain a- thai trait or iron deficient individuals, 89 p-tal trait, 20 doubtful individuals for p-thal. homozygousity or 8p- thalassemic and HPFH, 18 MCV<79fl.HbA2 > 3.7 and HbF>2 individuals for uncertain thalassemic condition,24 HbSS, 31 HbAS, 31 S-thal., 26 HbAE, 6 HbSE, 4 HbAD, 2 D-thal., 3 HbSD, 1 HbJ-Paris- 1 and 10 cord blood samples. The following procedures such as Coulter analysis, CA electrophoresis, HbA2 quantitation by micro column chromatography and determination of HBF by the alkali denaturating method were performed before HPLC analysis. The separation and quantitation of hemoglobins such as HbF, HbA, HbA2, HbS, HbD, HbE and HbJ-Paris- I were excellent in cation exchange HPLC by using a weak cation exchanger PolyCAT-A column. Reversed phase HPLC method is ideally suited for the detection of normal and abnormal globin chains and their quantitation by using C4 column. In our study the separation and quantitation of HbE which coelutes with HbA2 in cation exchange HPLC and also y-chain variants such as Gy, Ayl and AyT were excellent. Semi-quantitative data based on the calculation of the a /non a ratios allow the detection of a or p- thalassemic conditions. Keywords: HPLC, Cation exchange, Anion exchange, Abnormal hemoglobins, p- thalassemia VIII