Mide kanserlerinde tespit edilen H. pylori suşlarında cagA ve vacA insidansı ile antibiyotik duyarlılıklarının belirlenmesi

Abstract

ÖZET MİDE KANSERLERİNDE TESPİT EDİLEN HELİCOBACTER PYLORİ SUŞLARINDA VacA ve CagA İNSİDANSI İLE ANTİBİYOTİK DUYARLILIKLARININ BELİRLENMESİ Helicobacter pylori (H. pylori) CagA ve VacA toksinlerinin, gastroduodenal patoloji ve gastrik karsinoma oluşumuna yol açan, mikroorganizmaya ait en önemli virulans faktörleri olduğu ileri sürülmektedir. Ancak yapılan çok sayıdaki çalışmada bu genellemenin doğru olmadığı, virulans faktörlerinin bölgesel farklılıklar gösterdiği tespit edilmiştir. Bu çalışmada, bölgemizde görülen gastroduodenal patoloji ve gastrik karsinomalar ile H.pylori CagA ve VacA toksinleri arasındaki ilişkinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Çalışmada, mide veya duodenal ülserli toplam 53 hasta ile gastrik karsinomalı 12 hastadan alınan biopsi örneklerinden izole edilen, H.pylori suşları cagA ve vacA gen bölgelerinin gösterilebilmesi için PCR yöntemi ile değerlendirilmiştir. Ayrıca, hastalardan alınan serum örneklerinde H.pylori tüm hücre antijenleri ile VacA ve CagA toksinlerine karşı IgG ve IgM türü antikorlar ELISA yöntemi ile araştırılmıştır. Mide veya duodenal ülserli hastalara ait biopsi örneklerinin 34 (%64.1)'ü ile gastrik karsinomalı hastalara ait örneklerin 7 (%58.3)'sinde H.pylori, % 7 at kanlı Colombia agar besiyerinde izole edilmiştir. Ülserli hastalardan izole edilen suşlardan 15'inde cagA ve vacA, 6'sında ise sadece cagA olmak üzere % 61.7 (21/34) inde PCR ile cagA ve vac A gen bölgeleri bulunmuştur..Kanserli hastalardan izole edilen suşların ise 3 'ünde cagA ve vacA bir örnekte de sadece cagA olmak üzere izolatların % 57.1 (4/7)sinde toksijenik gen bölgeleri gösterilmiştir. Ülserli gruptaki hasta serumlarının 51 (%96.2) 'inde EIA yöntemi ile H.pylori tüm hücre antijenlerine karşı IgG türü antikor cevabı görülmüştür. Bu grupta 31 (%59.6) serum örneğinde hem CagA hem de VacA toksinlerine karşı IgG türü antikor belirlenirken, 8 hastada sadece cagA' ya karşı antikor tespit edilmiştir. Kanserli hasta grubunda ise serum örneklerinin 11 (%91.6)'inde tüm hücre antijenlerine, 7 (%58)'sinde her iki toksine 2'sinde de sadece cagA'ya karşı olmak üzere toplam 9 (%75)'unda IgG seropozitifliği tespit edilmiştir. Sonuç olarak ; H.pylori, ülserli hastalara ait biopsi örneklerinin %64.1' inde, kanserli hastalara ait biopsi örneklerinin ise %58'inde izole edilmiştir. Ülserli hastalardaki yüksek oran istatistiksel olarak önem arz etmemekte olup, kanserli hücrelerdeki metaplastik hücrelerin, H.pylori kolonizasyonunun duyarlılığında azalma olduğunu göstermektedir. Ülserli hastalardan izole edilen suşların %44.1'inde vacA geni ile birlikte % 61.7 cagA gen bölgesi gösterilirken, kanserli hasta izolatlarının % 42.8'inde vacA ile beraber % 57.1 cag A gen bölgesi tespit edilmiştir. Bölgemizde görülen gastroduodenal patoloji ile vacA pozitif suşların (% 44.1 ve % 42.8) ilişkisi gösterilemezken, CagA toksijenik genine sahip suşların gastroduodenal patoloji ile ilişkilerinin vıııolabileceği, ancak ülserlerde cagA'nın daha önemli bir virulans faktörü olduğu (% 61.7 ve %57.1) görülmüştür. Hasta gruplarında H.pylori tüm hücre antijenlerine karşı yüksek oranda görülen serokonversiyon (% 96.2 ve % 91.6), H.pylori enfeksiyonlarının bölgemizdeki görülme sıklığını ve gastroduodenal patoloji ile muhtemel ilişkisini yansıtmaktadır. Ayrıca cagA ve vacA seropozitiflik oranının her iki grupta da %50 (58-75)nin üzerinde olması, toksinlerin patoloji ile ilişkisinin olabileceğini ancak kanser oluşumu için tek başına bir faktör olmadığını göstermiştir. Anahtar Sözcükler: CagA, H.pylori, PCR, VacA IX

ABSTRACT Determination of cagA and vacA incidence and antibiotic susceptibility of Helicobacter pylori strains in gastric carcinoma. H.pylori CagA and VacA toxins are proposed as the most important virulance factors belongs to microorganisma which causes gastroduodenal pathology and gastric carcinoma.However, this generalisation is disproved by many studies and it is found that the virulance factors show regional differences. İn this study.we aimed to investigate the relationship between H.pylori toxins (CagA and VacA) and gastroduodenal pathology and gastric carcinoma which are seen in our region. In the study, cagA and vacA gene regions of H.pylori strains which are isolated from biopsies from total 53 patiens having duodenal ulcer and 12 patiens having gastric carcinoma evaluated with PCR technique.Additionally serum samples from these patients detected for the total cell antigens and IgG and IgM antibodies against to Vac A and CagA toxins with ELISA method. H.pylori was isolated from biopsy samples from patients with duodenal ulcer and gastric carcinoma with a ratio of 34% and 58.3%, respectively, in the Colombia agar medium containing %7 horse blood.We have found cagA and vacA gene regions in 15 and only cagA region in 6 strains which are isolated from patients with duodenal ulcer in 61.7%,(21/34 of them).We have shown toxigenic gene regions in 57.1% (4/7) of the strains isolated from the patients with cancer, cagA and vacA in 3 strains and only cagA in one strain. We have seen IgG like antibody response against to the hole cell antigens of H.pylori in 51 (96.2%)of the serum samples in ulcerated patients with EIA method.ln this group, we have detected IgG like antibodies to both CagA and VacA toxins in 31 serum samples but only CagA toxin in 8 patients.Howewer.it was detected that IgG antibodies against to the hole cell antigens in 11 sample IgG antibodies against the two toxins (CagA and VacA) in 7 sample and IgG antibodies against only the cagA in 2 samples (total 9 seropositive for IgG) belong to the patient group with cancer. As a result, H.pylori was isolated from biopsy samples belong to patients having ulcer and cancer with a ratio of 64.1% and 58%, respectively. The high ratio in patients with ulcer is important statistically and it shows decrease in the colonization sensitivity for H.pylori in the metaplastic cells at cancerous tissue. We have determined vacA gene in 44.1% of strains isolated from the patients with ulcer( in the 61.7% of them also vacA gene ),cagA gene in 57.1% of strains isolated from cancerous patients ( in 42.8% of them also vacA gene).We could not show a relationship between gastroduodenal pathology and vacA positive strains.However we think that, the strains of CagA toxin gene can be responsible for the gastroduodenal pathology and the cagA gene is more important virulance factor in ulcer.The seroconversion to hole cell antigens seen in the patient groups reflects the incidence at H. pylori infection and possible relationship with gastroduodenal pathology. In addition, the presence of cagA and vacA seropositivity which is over 50% in the two groups has shown the relationship of the toxins with the pathology but it is not a single factor for the pathology. Keywords: CagA, H.pylori, PCR, VacA XI