Testiste deneysel torsiyon/detorsiyon sonucu oluşturulmuş iskemi/reperfüzyon hasarında ganoderma lucidum ile yönlendirilmiş kök hücre`nin iyileştirici etkisi

Abstract

Testis torsiyonu (TT), erkek infertilitisinde önemli ürolojik tıbbi acil durumdur. TT iskemi/reperfüzyon (İ/R) hasarı ile oksidatif stres ve apoptoz mekanizmalarını kullanarak zarar vermekte ve PI3K/AKT/mTOR sinyal yolağı ile ilişkilendirilmektedir. Ganoderma Lucidum (GL) ölümsüzlük mantarı olarak bilinip tamamlayıcı tıp uygulamalarında geniş bir yer bulmaktadır. Mezenkimal Kök Hücre (MKH) faz çalışmalarını geçmiş klinikte kullanılmakta olan önemli bir üründür. Her iki ürününde değişik dozlarda olumlu etkileri gösterilmişken TT üzerindeki etkileri ve sinyal yolağı ile olan ilişkileri bilinmemektedir. Bu çalışmada GL, MKH ve birlikte kullanımlarının İ/R hasarında koruyucu etkilerinin histokimyasal, immünohistokimyasal ve biyokimyasal olarak değerlendirilmesi amaçladı. Wistar Albino genç erişkin erkek sıçanlar kontrol (KR), Taklit (TL), İ/R, İ/R+GL, İ/R+MKH, İ/R+GL+MKH olarak 8 örnekte çalışıldı. 50 mg/kg i.p. GL, 1x106 Yağ dokusu MKH ve birlikte (GL+MKH) uygulamaları 100 µl sıvı içinde reperfüzyondan yarım saat öncesi uygulandı. İ/R modeli için sıçanların sol testislerine 720º rotasyon ile 2 saat torsiyon, 4 saat detorsiyon yapıldı. Testisler çıkarılarak bouin solüsyonunda 48 saat tespit edildi, rutin histolojik incelemeye alındı. Kesitler H-E, PAS ve MT ile histokimyasal boyandı ve Johnsen skoruna göre hasar ve uygulama etkisi değerlendirildi. Oksidatif stress için eNOS, apoptoz için TUNEL ve sinyal yolakları için PI3K/AKT/mTOR immünohistokimyasal yöntem ile incelendi. İmmün boyamalar H-skor ile kantite edildi. Sıçanların kan örneklerinde SOD ve MDA ELİSA yöntemi ile belirlendi. Örneklerin TESE ile spermleri toplanıp morfolojik anamoli, canlılık ve hareket açısından analizi yapıldı. Sonuçlar One-Way ANOVA istatistik testi ile GrahPad yazılımında istatiksel değerlendirildi. Makroskobik ve histopatolojik verilerde TT ile oluşan İ/R örneklerinde patolojik değişikliklerin oldukça anlamlı olduğu, artan eNOS ve TUNEL ile azalan PI3K/AKT/mTOR immunohistokimya bulgularının GL, MKH ve özellikle birlikte kullanımlarının anlamlı bir koruma ve iyileşme sağlayarak KR ve TL grupları düzeyine döndüğü bulundu. Biyokimyasal verilerde İ/R grubunda oldukça anlamlı olarak azalan SOD ve artan MDA düzeylerinin GL, MKH ve özellikle birlikte kullanımlarının anlamlı bir etki ile KR ve TL grupları düzeyine döndüğü saptandı. İ/R örneklerinde incelenen spermlerin artan anamoli ve azalan canlılık ile hareket değerlerinin düzeylerinin GL, MKH ve özellikle birlikte kullanımlarının anlamlı bir etki ile KR ve TL grupları düzeyine döndüğü saptandı. Bulgularımıza göre TT ile gelişen İ/R hasarında, oksidatif stres, apoptoz ve sinyal yolağı ilişkili hasarda bitkisel ekstrakt ile birlikte hücresel tedavinin anlamlı bir katkı sağladığı gösterildi. Acil vakalarda detorsiyon öncesi erken dönemde yapılacak bu uygulamalarının reperfüzyon hasarında koruyucu olacağı, erkek infertilitesini engelleyici, yaşam kalitesini arttırıp maliyetleri azaltacağı ve sosyal etkileri ile önemli yararları olacağı ayrıca faz çalışmalarına başlanmasının uygun olduğu düşünüldü. Anahtar Kelimeler: Testis Torsiyonu, Sperm, İskemi/Reperfüzyon, Ganoderma Lucidum, Mezenkimal Kök Hücre, PI3K/AKT/mTOR.

Testicular Torsion (TT) is an important urological medical emergency in male infertility. TT is damaged by Ischemia/Reperfusion (I/R) damage using oxidative stress and apoptosis mechanisms and is associated with the PI3K/ACT/mTOR signaling pathway. Ganoderma Lucidum (GL) is known as immortality mushroom and finds a wide range of complementary medical applications. Mesenchymal Stem Cell (MSC) is an important product used in clinical practice past phase studies. The effects on TT and the relationship with the pathway are not known, although positive effects are shown in the different noses in both cases. In this study, it was aimed to evaluate histochemical, immunohistochemical and biochemical protective effects of GL, MSC and co-administration on I/R injury.Wistar Albino young adult male rats were studied in 8 samples as control (KR), sham (TL), I/R, I/R + GL, I/R + MSC and I/R + GL + MSC. 50 mg / kg ip. GL, 1x106 ADMSC and GL + MSC were administered in 100 μl of the reperfusion half an hour before in the fluid. For the I/R model, the left testes of the rats were given 2 hours of torsion with 720º rotation and 4 hours of detorsion. The testes were removed and fixed in bouillon solution for 48 hours, and histologically examined routinely. The sections were histochemically stained with H-E, PAS and MT and the damage and application effect according to Johnsen score was evaluated. eNOS for oxidative stress, TUNEL for apoptosis and PI3K/AKT/mTOR immunohistochemistry for signaling pathways. Immunochromatography was quantified by H-score. SOD and MDA were determined by ELISA method in blood samples of rats. Samples were collected with TESE and analyzed for morphological anamoly, viability and movement. Results were statistically evaluated in GrahPad software with One-Way ANOVA statistical test.The pathologic changes in I/R specimens with TT in macroscopic and histopathologic data were found to be quite significant, and increased PI3K/AKT/mTOR immunohistochemical findings with increasing eNOS and TUNEL showed significant protection and recovery of GL, MSC and combined use. Decreased SOD and increased MDA levels in the I/R group of biochemical samples were significantly reduced by GL, MSC and especially by the combined use of KR and TL groups. It was determined that the levels of the increased anomaly and diminished vitality and movement values of the sperms examined in the I/R samples returned to the levels of KR and TL groups with a significant effect of GL, MSC and especially co-use.According to our findings, I/R injury caused by TT showed a significant contribution of cellular therapy with herbal extracts in oxidative stress, apoptosis and signal pathway related injury. These applications to be performed before detortion period should be effective in preventing reperfusion injury, preventing male infertility, increasing quality of life and decreasing costs with social benefits where starting phase studies should start.Key words: Testicular Torsion, Sperm, Ischemia/Reperfusion, Ganoderma Lucidum, Mesenchymal Stem Cell, PI3K/AKT/mTOR.