Acinetobacter psychrotolerans suşlarından izole edilen lipazın karakterizasyonları

Abstract

Bu çalışmada, Acinetobacter psychrotolerans Xg1 ve Xg2 suşlarının lipolitik aktiviteleri Tween 20, Tween 80 ve Tributirin agar besiyerinde kalitatif olarak belirlenmiştir. Lipaz aktivite deneyi için Rhodamine B agar besiyeri kullanıldı ve her iki suşta pozitif sonuç verdi. Lipaz aktiviteleri, p-nitrofenil palmitat kullanılarak spektrofotometre ile kantitatif olarak ölçülmüştür. Xg1 ve Xg2 suşlarının lipaz aktiviteleri sırasıyla 0,14 ve 0,13 U dır. Xg1 suşunun zamana bağlı en yüksek enzim üretimi 24. saatte olurken Xg2 suşunun 48. saatte olduğu görüldü. Acinetobacter psychrotolerans Xg1 ve Xg2 suşlarının ekstraselüler lipazları karakterize edildi. Her iki suşun enzimlerinin maksimum aktivitesi pH 8 ve 30 oC?de görülmüştür. Hekzan, etil asetat, kloroform ve N,N dietil formamid organik çözücülerin varlığında yüksek stabilite göstermiş, izopropanol, asetonitril ve bütan-1-ol çözücüleri varlığında lipaz aktivitelerinde azalmalar saptanmıştır. Xg1 suşunun enzim aktivitesini FeCl3, CuCl2 ve ZnCl2 önemli ölçüde azaltmıştır. Xg2 suşunu ise CuCl2 ve ZnCl2 metal iyonlarının enzim aktivitesini azaltmıştır. EDTA ajanı, Xg1 ve Xg2 suşlarının ürettiği lipazın aktivitesini azaltırken, SDS neredeyse tamamen inhibe etmiştir. Xg1 ve Xg2 suşlarından elde edilen kültür süpernatantları ile sırasıyla, ultrafiltrasyon, jel kromatografi, SDS-PAGE ve aktivite çalışmaları yapıldı.

In this study, lipolytic activities of Acinetobacter psychrotolerans Xg1 and Xg2 strains were qualitatively determined in Tween 20, Tween 80 and Tributirin Agar. For lipase activite test was used Rhodamine B agar medium. Both strains gave positive results in this medium. Lipase activities using p-nitrophenyl palmitate was quantitatively measured by a spectrophotometer. The highest lipase activities of Xg1 and Xg2 strains were 0,14 and 0,13 U, respectively. Time course of enzyme activity by Xg1 was found in the 24th hour, but Xg2 was found in the 48th hour. Next, extracellular lipases of Acinetobacter psychrotolerans Xg1 and Xg2 strains were characterized. Both enzymes exhibited maximum activity at pH 8 and 30 oC. The enzyme exhibited the highest stability in the presence of various organic solvents such as hexane, ethyl acetate, chloroform and N,N dietil formamid, but it was determined reducing at organic solvents isopropanol, asetonitril and bütan-1-ol. The lipase of Xg1 strain was inhibited in the presence FeCl3, CuCl2 ve ZnCl2, but the lipase of Xg2 strain was inhibited in the presence CuCl2 ve ZnCl2. When in presence EDTA, the lipase activities of Xg1 and Xg2 strains was inhibited. İn presence SDS, they was exactly inhibited. In culture supernatants obtained from Xg1 and Xg2 strains were performed ultrafiltration, gel filtration chromatography, SDS-PAGE and activite tests, respectiviely.