Üç boyutlu biyosargı geliştirilmesi için kolajen ve dopa`nın biyoteknolojik üretimi

Abstract

Yara iyileşmesi birbirinden farklı hücreler, hormanlar ve büyüme faktörlerinin rol aldığı karmaşık bir olaydır. Son yıllarda, aljinat, kolajen, kitosan vb. içeren birçok yara sargısı ticari olarak ortaya çıkmıştır. Bu çalışmada kolajen tabanlı yara iyileşmesine katkıda bulunacak MADOPA içeren hidrojel geliştirilmiştir. Hidrojelde kullanılacak kolajen, koyun derisinden pepsin ekstraksyon yöntemi ile izole edilmiş, Sirius red miktar tayini, Uv-vis spektroskopisi, CD spektroskopisi, SDS-page ve FT-IR-ATR ile karakterizasyonları gerçekleştirilmiştir. Hidrojelin diğer yapı taşı olan MADOPA üretimi için, kültür Mantarından (Agaricus Bisporus) tirozinaz enzimi ekstraksyon, amonyum sülfat çöktürmesi ve sephadex g-75 jel filtrasyon ile saflaştırılmıştır. Saflaştırma sonucunda karakterizasyonlar, FT-IR, SDS-page, BCA miktar tayini, tirozinaz aktivite tayini şeklinde yapılmıştır. Çalışmamızdaki üçüncü basamak poli (HEMA-MAH-Cu(II) kriyojel kolon kullanarak immobilize tirozinaz sistemi geliştirmektir. Elde edilen kolonun karakterizasyonu şişme testi, FT-IR, SEM ve kolon verimi ile karakterize edilmiştir. Dördüncü basamak MAT'ın MADOPA'ya dönüşmesidir. Bu basamakta immobilize ve serbest enzimin aktivite farkları son ürün MADOPA'ya bakarak karşılaştırılmıştır. Son basamak olarak yara sargısı olarak kullanılacak Kolajen-ko-DOPA-ko-MATrp-Ru(bipyr)2-Cl hidrojel sargı 3B biyoyazıcı ile geliştirilmiştir. Bu materyal, biyobozunabilir, biyouyumlu ve non-toksiktir.

Wound healing complicated process including different cells, hormones and growth factors. In last decades, There has been a lot of commercial products about the wound dressing including, alginate, collagen, chitosan etc. In this study, MADOPA-containing hydrogel was developed to contribute collagen-based wound healing. Collagen was isolated from the sheep skin by pepsin extraction method and charecterized with Sirius red quantification, Uv-vis spectroscopy, CD spectroscopy, SDS-page and FT-IR-ATR. Tyrosinase enzyme from edible mushroom (agaricus bisporus) was partialy purified by exraction, ammonium sulfate precipitation and sephadex g-75 gel filtration for the production of MADOPA, which is the other composition of hydrogel. Charecterization of tyrosinase was performed with FT-IR, SDS-page, BCA quantification and tyrosinase activity determination. Third part of the working is devolepment of immobilise tyrosinase system with poli (HEMA-MAH-Cu (II) cryogel column. Swelling test, FT-IR, SEM monitoring and yield of the column was performed for charecterization. Transformation of MAT to MADOPA is the fourth part of the working. In this step, diffarences between free and immobilise enzyme was compared with the production of MADOPA. Final part of working was production of collajen-co-DOPA-co-MATrp-Ru(bipyr)2-Cl with 3D hidrogel for wound dressing. This material is biodegradable, biocompatible and non-toxic.