Alkolik rat testislerindeki apoptozis`in kontrol grubuyla karşılaştırılması

Abstract

ÖZET : Çalışmamızın esas amacı uzun süreli alkol kullanımının erkek gonadlannda meydana getireceği doku zararın araştırılmasıydı. Bu nedenle alkolik rat testisi dokulanndaki apoptozisi, kontrol gruptaki testis apoptozisi ile karşılaştırmaya karar verdik. Çalışmamızda apoptozisin incelenmesi için deney hayvanı olarak Sprague- Dawley ırkı ratlar kullanıldı. Her birinde 10 adet ergin erkek rat bulunan alkolik grup ve kontrol grubu olacaki şekilde iki temel deney grubu meydana getirdik. Her iki gruptaki denekler kontrollü sıcaklık ( 22 ± 3 C° ) nisbi nem (62 ± 7% ) ve aydınlatma ( günde 12 saat karanlık ve 12 saat aydınlık) olacak şekilde yetiştirildi.Alkolik gruptaki ratlar 12 hafta boyunca ethanollü sıvı diyetiyle beslenirken, kontrol grubundakiler de normal izokalorik diyetle beslendi. 12 haftalık sürenin ardından, ethanol uygulanmış ratların kan-ethanol seviyeleri enzimatik biyokimyasal metodlarla test edildi ve bu deneklerin başarıyla kronik alkolik hale getirildikleri görüldü.Her iki gruba ait testis dokuları, % 10 'luk formaldehit çözeltisinin sol ventrikülden perfüze edilmesiyle fikse edildi ve çıkarıldı.Dokular en az iki gün formaldehit solüsyonunda bekletildi. Ethanolle dehidre edilmelerinin ardından parafine gömüldü ve immunositokimyasal çalışma için seri parafin kesitler alındı (5 u kalınlıkta). Apoptotik alanları teşhis etmek için Caspase-3 Ab-4 ( CPP32) antikoru kullanıldı.Daha sonra boyalı kesitler gözlendi ve apoptotik seminifer tubüller fotoğraflandı.Kontrol ve alkolik grup arasında bir karşılaştırmaya gidebilmek için ışık mikroskobunda x400 büyütmede apoptotik hücreler sayıldı.Daha sonra seminifer tubül çaplarım karşılaştırmak için seminifer tubül çapları mikrometreli ışık mikroskobuyla ölçüldü.Bulgular istatistiksel yöntemlerle değerlendirildi ve iki grup arasında yapılan apoptozise yönelik karşılaştırmada, alkolik rat grubunda diğer gruba nazaran belirgin bir apoptotik artış olduğunu gösteren anlamlı farklar bulundu (p<0,05). Görüldü ki ethanol uygulanmış radarda, alkole bağlı olarak apoptozis'de bir indüklenme sözkonusuydu. Bu bulgular da testisteki doku hasarının alkole de bağlı olabileceğini ispatlamak için yeterliydi.

SUMMARY : The aim of our study is to investigate the tissue injury of male gonads, depending on the long-term alcohol usage.On this account, we decided to compare the apoptozis in testis tissues of alcoholic rats with the control group. For this study Sprague-Dawley rats have used as subject material in investigation of apoptozis. We composed two main groups ; alcoholic rats and the control group including 10 adult male rats in each.The subjects in each group were housed under controlled temperature ( 22 ± 3 C° ) and humidity ( 62 ± 7% ) and lighting ( 12 h darkness and 12 h lightness a day ). The rats in alcoholic group were fed ethanol in liquid diet for 12 weeks while the control ones were fed normal izocaloric diet. Hence, the blood-ethanol levels of the ethanol-threated rats were tested in enzymatic biochemical methods and its seen that these subjects had become chronic alcoholic succesfully. The testis tissues of both group were fixed by perfusion of % 10 formaldehyde through left ventricle and taken out after thatThese tissues were further fixed in formaldehyde solution for at least 2 days.After dehydration by ethanol they were embedded in paraffin and serial paraffin sections (5 u thickness) were used for immunohistochemistry.Caspase-3 Ab-4 ( CPP32 ) antibody was used to identify the caspase reaction in apoptotic regions.Hence, the stained sections were sighted and the apoptotic seminifer tubules were photographed.For the comparison of apoptozis between the alcoholic group and the control one, apoptotic germ cells were counted in x 400 magnification in light microscope. And then another analyse was made to identify the diameter of seminifer tubules(ST).The diameters of ST were measured with the use of light microscope with micrometre.The findings had compared in each other and found significant differences in apoptozis between each group ( p < 0,01). Its seen that apoptozis was significantly induced in ETR related to the overuse of ethanol. These findings were sufficient to prove the tissue injury of testis may depend on alcohol usage. VI