İleri pasaj mezenkimal kök hücrelerin aquaporin profilinin erken pasaj mezenkimal kök hücrelerle karşılaştırılması ve adipojenik farklılaşma verimi üzerindeki etkisinin belirlenmesi

Abstract

Amaç: Kök hücrelerin ileri ve erken pasajlarında hücre yapılarının farklılık gösterdiği bilinmektedir. Hücre yaşamında önemli rolleri olan aquaporinler (AQP), kök hücre yaşam döngüsü ve farklılaşmada önemli role sahiptir. Çalışmamızın amacı ileri pasaj kemik iliği kaynaklı mezenkimal kök hücrelerde (Kİ-MKH) aquaporin profilini erken pasaj ile karşılaştırmak ve adipojenik farklılaşma sonrası aquaporin değişimlerini inceleyerek farklılaşma üzerine katkısını belirlemektir.Yöntem: Bu amaçla çalışmamızda Kİ-MKH'leri kullanılmıştır. Hücrelerin karakterizasyonu flow sitometri ile kök hücre yüzey belirteçleri kullanılarak değerlendirilmiştir. Karakterize edilen Kİ-MKH'leri pasaj 3 (P3) ve pasaj 8 (P8)'de kontrol ve farklılaşma gruplarına ayrılarak 0., 1., 3., 7., 14. ve 21. günlerde AQP1, AQP3, AQP7, AQP9 ve AQP10 düzeyleri Real Time-PCR, ELİSA ve immunfloresan çalışmaları yapılarak değerlendirilmiştir. Bulgular: Flow sitometri ile hücrelerin Kİ-MKH olduğu doğrulanmıştır. Kİ-MKH, P3 ve P8'e getirildiğinde farklılaşma başlatılmıştır ve ilerleyen günlerde AQP protein ekspresyonlarının önce yükseldiği sonra düştüğü görülmüştür. P3'teki yükselmelerin P8'e göre daha erken günlere denk geldiği gözlemlenmiştir. Gen ekspresyonu analizinde ise protein ekspresyonlarının düştüğü günlerde AQP gen ekspresyonu seviyelerinin istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde arttığı görülmüştür. Ayrıca ileri ve erken pasaj AQP profilleri açısından istatistiksel olarak anlamlı farklılıklar bulunmuştur. Sonuç: Çalışmamızda pasaja göre aquaporin profili Kİ-MKH'lerde ilk kez incelenmiştir. Gen ve protein ekspresyonları arasındaki karşılıklı değişimler bize AQP'lerin farklılaşma sürecine katkıda bulunduğunu göstermektedir. Ayrıca çalışmamızda yaşlanma ile farklılaşma potansiyeli arasında olan ilişkiye AQP profilinin katkısı olduğu gösterilmiştir. Bu ilişkide AQP'lerin rolü hücre yaşlanmasıyla ilgili olası önlemler ve uygulanabilecek tedavi yaklaşımlarının geliştirilmesine katkıda bulunabilir.

Objective: Cell structures are known to be different in the early and later passages of stem cells. Aquaporins (AQP), which have important roles in cell life, have an important role in stem cell life cycle and differentiation. The aim of our study is to compare the aquaporin profile of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in later passages with early passage and to determine the contribution of aquaporin changes on differentiation while investigating the changes of aquaporin after adipogenic differentiation.Method: For this purpose, BM-MSCs were used in our study. Characterization of the cells was evaluated by flow cytometry using stem cell surface markers. Characterized BM-MSCs are divided into control and differentiation groups in passage 3 (P3) and passage 8 (P8) on days 0, 1, 3, 7, 14 and 21 AQP1, AQP3, AQP7, AQP9 and AQP10 levels were evaluated by Real Time-PCR, ELISA and immunohisyochemistry studiesResults: The cells used were bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSCs) confirmed by flow cytometry. BM-MSCs were brought to P3 and P8, differentiation was initiated and in the following days it was seen that AQP protein expressions were decreased after the initial rise. It was observed that the elevations in P3 corresponded to earlier days than P8. On the other hand, AQP gene expression levels were found to increase statistically significantly in gene expression analysis on the days when protein expressions fall. In addition, there were statistically significant differences in AQP profiles for both late and early passages.Conclusions: In our study, the aquaporin profile related to the passage was examined for the first time in BM-MSCs. Mutual changes between gene and protein expression indicate that AQPs contribute to the differentiation process. In addition, the AQP profile has been shown to contribute to the relationship between aging and differentiation potential. The role of AQPs in this relationship may contribute to the development of possible preventive measures and treatment approaches for cell aging.