Ökaryot elongasyon faktörü 2(EF-2)`nin farklı dokularda eldesi ve miktarlarının karşılaştırılması

Abstract

5. ÖZET Bu çalışmada ökaryotlarda protein sentezinin uzama evresinde etkin olan elongasyon faktörü 2 (EF-2) sıçan karaciğer, dalak ve beyin dokulardan amonyum sülfat kesimlemesi, DE-52 kolon kromatoğrafisi ve P-1 1 kolon kromatografisiyle kısmen saflaştırılmıştır. Saflaştırma verimleri kıyaslandığında karaciğer dolusunu EF-2 eldesi için en uygun durum olduğu gözlenmiştir. Ayrıca elde edilen EF-2 miktarı ve toplam protein miktarı açısındanda karaciğer dokusunun dalak ve beyin dokusuna kıyasla üstün olduğu belirlenmiştir. Saflaştırma sürecinde EF-2 miktarı EF-2'nin ADP-ribozillenme reaksiyonu izlenerek saptanmış, farklı kesimler elektroforetik analizi gerçekleştirilmiştir. Ayrıca, S-100 kesimlerinde EF-2'nin fosforillenme etkinliği incelemiştir, izlenen saflaştırma işlemleri arasında DE-52 kolon kromatografisiyle en yüksek saflaştırma katsayısı elde edilmiştir. Saflaştırma katsayısı karaciğer, dalak, ve beyin için sırasıyla 4350, 2200, ve 180 olarak belirlenmiştir. 41

6. SUMMARY Eukaryotic elongation factor (EF-2) which has an important function in the elongation step of protein sy nthesis has been partially purified from rat liver, spleen and brain extracts by ammonium sulfate preapitation, DE-52 and P-1 1 chromatography. Liver proved to be superior to spleen and total protein recovery. The amount of EF-2 was determined by the ADP-ribosylation reaction of EF-2. EF-2 recovery was also assessed by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis of purified fractions and the incorporation of 32P ATP into S-100 extracts. 42