Kısa süreli akut diyabet oluşturulmuş sıçanlarda lens glutatyonu,lens proteinlerinin non-enzimatik glikozilasyonu ve elektroforezi

Abstract

71 VI- ÖZET Bu çalışmada toplam 25 adet Wistar Albino türü dişi sıçan kullanıldı. 1 1 tanesi kontrol gru bu olarak ayrıldı. 14 tanesinde ise 75 mg/kg'lık STZ enjekte edilerek diyabet oluşturuldu. STZ enjeksiyonundan 5 hafta sonra tüm sıçanların kalp kanlan alındı ve lensleri intrakap- süler olarak çıkarıldı. Kan örneklerinde şeker ve glikozillenmiş hemoglobin tayini; lens ör neklerinde ise, protein, nonenzimatik glikozilasyon, glutatyon tayinleri ve protein elektrofo- rezi yapılarak kontrol grubu ile karşılaştırıldı. STZ verilmeden önce kontrol grubu sıçanların ağırlıkları 169.55 ± 17.96 g, kan şekeri de ğerleri % 159.36 ± 19.17 mg olup diyabet grubunda ise sırası ile 171.43 ± 19.35 g ve % 147.64 ± 18.24 mg idi (P: 0.805, 0.133). STZ enjeksiyonundan 5 hafta sonra diyabet grubu sıçanları 151.71 ± 22.69 grama zayıflar ken, kontrol grubu sıçanları 173.18 ± 13.83 gram oldu. Kontrol grubu sıçanlarının % 147.64 ± 23.44 mg olan kan şekeri ve % 4.46 ± 0.97 olan glikozillenmiş hemoglobin değer leri diyabet grubunda sırası ile % 441.07 ± 179.84 mg ve % 5.57 ± 0.97 değerlerine yüksel di (P:0.0001, 0.009). Deney sonunda her bir sıçanın gözlerinden çıkarılan iki lens birleştirilerek tek bir lens gibi çalışıldı. Kontrol grubu sıçanların total lens proteinleri % 49.73 ± 5.68 mg iken diyabetik sı çanların % 54.36 ± 6.62 mg idi (P:0.078). Diyabet grubunun lens glutatyon değerleri (1.56 ±0.61 nmol glutatyon/1 mg protein)-72- kontrol grubundan (2.81±0.85 nmol glutatyon / 1 mg protein) anlamlı derecede düşüktü (P:0.0001). Lens proteinlerinin nonenzimatik glikozilasyonu kontrol grubunda 1.25 ±0.35 nmol Fruktoz/1 mg protein iken diyabet grubunda 3.61 ± 1.88 nmol Fruktoz/1 mg protein olarak oldukça yüksekti (P:0.0001). Lens homojenizatları SDS-poliakrilamid jel elektroforezine tabi tutulduğunda 19 farklı pro tein bandı tespit edildi. Bunların içinde en belirgin ve miktarca en fazla olanların molekül ağırlıkları 108131-13540 arasında değişmekteydi. Diyabet grubunda kontrol grubuna göre 108131, 41953,38770 molekül ağırlığına tekabül eden 1, 7, 8 no.lu protein bandlarındaki artış çok anlamlı idi (P: 0.001). Diyabet grubunda 1,7,8,9,11,12,14,17 no.lu bantlara teka bül eden proteinler artarken 2,3,4,6,13,15,16,18,19 no.lu bantlara tekabül eden proteinler azalmakta idi. 5 ve 10 no.lu bantlar ise değişmemekte idi. Genelde tüm parametrelere korrelasyon analizi uygulandığında çok anlamlı korrelasyonlar tespit edilemedi. Sonuç olarak, kontrolsüz diyabet 5 hafta gibi kısa bir sürede lensi de etkileyerek lens glu- tatyonunun azalmasına ve lens proteinlerinin nonenzimatik glikozilasyonunun ve yüksek molekül ağırlıklı proteinlerin artmasına neden olmuştur.

73 VII- SUMMARY In this study fourteen female Wistar Albino rats were made diabetic by one intraperitonal injection of 75 mg/kg STZ. The other eleven rats were used as a nondiabetic control gro up. Five weeks after, STZ injection, samples of cardiac blood were taken and lenses were extracted intracapsullarily. Blood glucose and glycosylated haemogldbin were determined in the blood samples. Total protein, nonenzymatic glycosylation and glutathione were de termined and protein electrophoresis carried out in the lens homogenizates. All parame ters were compared with results obtained from the control group. Prior to diabetes induction the weight and blood glucose of the rats was respectively 169.55 ± 17.96 g and 159.36 ±19.17 mg/dl in the control group and 171.43 ± 19.35 g and 1 47.64 ± 1 8.24 mg/dl in the diabetic group (P:0.805, 0. 1 33). At the end of five weeks, the diabetic rats lost weight (151.71 ± 22.69 g) and the control rats gained weight (173.18 ± 13.83 g). While the blood glucose and glycosylated haemog lobin in the control group was 147.65 ± 23.44 * mg/dl and 4.46 ± 0.97 % respectively. Those in the diabetic group increased to 441.07 ± 179.84 mg/dl and 5.57 ± 0.97 % (P:0.0001, 0.009). Two lenses, extracted from one rat were pooled and investigated. Total lens protein was 49.73 ± 5.68 mg/dl in the control group and 54.36 ± 6.62 mg/dl in the diabetic group (P:0.078). While the lens glutathione was 2.81 ± 0.85 nmol/mg protein in the control group,74 it dropped to a level of 1.56 ± 0.61 nmol/mg protein in the diabetic group (P:0.0001). The nonenzymatic glycosylation of lens proteins increased to a level of 3.61 ± 1.88 nmol fructose/mg protein in the diabetic group from a level of 1.25 ± 0.35 nmol fructose/1 mg protein in the control group (P:0.0001). In the SDS polyacrylamide gel electrophoresis of the rat lens proteins, 19 different bands could be seen and the bands here in the same pozition for every sample. The molecular weights of high density bands were between 108131 and 13540. In the diabetic group the re was a significant increase in the bands the 1,7,8 having molecular weight of 108131, 41953 and 38770 compared with controls. While the diabetic group proteins with band no 9,11,12,14,17 increased, nos. 2,3,4,6,13,15,16,18,19 decreased. The other two bands (5,10) did not change. No significant correlations were found between any parameters. As a conclusion, we can say that uncontrolled induced diabetes after periods as short as five weeks, affected lenses, causing a decrease in lens glutathione and an increase in no nenzymatic glycosylation of lens proteins.