Ketokonazol ile inkübe edilmiş insan makrofajlarının Candida Albicans` a karşı hücre içi ölüm aktivitesinin in vitro araştırılması

Abstract

ÖZET Bu çalışmada ketokonazol (l,4,10ug/ml ) ile 4 saat inkübe edilen insan makrofaj lannın Candida albicans'a karşı hücre içi ölüm aktivitesi in vitro araştınlmıştır. Sağlıklı deneklerden alman venöz kan'dan monositler ficoll-hypaque gradient santrifüj yöntemi ile ayrılmış, tripan mavisi boyama yöntemi ile canlılık %98 olarak tespit edilmiştir. Monositler (5x1 05 hücre/ml) RPMI-1640 doku kültür ortamı içinde 37 °C de, 7 gün CO2 li nemli ortamda inkübe edilerek makrofaj kültürü elde edilmiştir. Makrofaj kültürüne C.albicans (lxlO5) ilave edilerek 30 dakika inkübe edilmiştir. Fagositoz sonrasında ketokonazol'un değişik konsantrasyonları 1,4,10 ug/ml (plazma konsantrasyonları) uygulanmış, hücreler 4 saat inkübe edilmiştir. İnkübasyon sonrasında C.albicans'ın hücre içi ölümü üzerine ketokonazol'un 0 zaman ve 4 saat sonra etkisi canlı koloni sayımı yöntemi ile saptanmıştır. Çift kontrollü ve 7 kez tekrarlanan çalışmamızda sonuç olarak ketokonazol ; 1, 4ug/ml konsantrasyonlarda; makrofajlann,C. albicans'a karşı hücre içi ölüm aktivitesini etkilememiştir (p>0.05). lOug/ml konsantrasyonda ise makrofajlar içinde C.albicans'ın hücre içi ölümünü kontrola göre anlamlı olarak arttırmıştır (p<0.05). 42

SUMMARY In this study, in vitro intracellular killing activity of human macrophages incubated with ketoconazole (1,4,10 fig/ml ) for 4 hours against Candida albicans was investigated. Peripheral venous blood was collected from healthy donors. Monocytes were isolated by ficoll-hypaque density gradient centrifugation. The viability of the cells assessed by trypan blue exclusion was 98%. Monocytes (5x10 cells/ml) were incubated in RPMI-1640 medium under CO2 atmosphere for 7 days and macrophages cultures were obtained. The growth culture of C.albicans (1x10 cells/ml ) was added to macrophage culture and incubated for 30 minutes. After phagocytosis various concentrations of ketoconazole ( 1,4,10 ug/ml ) were added to tins mixture and incubated for 4 hours. The viable cell counts were carried out at 0 time and after 4 hours of incubation to detect the killing activity of ketoconazole on C.albicans. All experiments were carried out 7 times with double controls. As conclusion, ketoconazole at 1 and 4 ug/ml. concentrations didn't affect the intacellular killing activity of macrophages against C.albicans (p>0.05), whereas at 10 ug/ml. concentration, ketoconazole significantly increased the intracellular killing of C.albicans when compared with control (p<0.05). 43