Normal ve oligospermik örneklerde belirli histokimyasal sıvıların sperm morfolojisi değerlendirmesi için optimize dozlarının floresan görüntüleme yoluyla araştırılması

Abstract

Necmettin Erbakan Üniversitesi Meram Tıp Fakültesi Tüp Bebek Ünitesine infertilite ön tanısı ile gelen hastaların spermiyogramları yapıldıktan sonra atık olan hastanın semen numuneleri çalışmaya alındı. Alınan 1 ml seminal plazma örneği üzerine 2 ml SF eklendi. Elde edilen 3ml karışımdan 1?er ml alınarak 3 ayrı ependorfa bölündü. Üzerlerine 10 µl boya eklendi. Son olarak pipeting yapılarak homojen hale geldi ve lamlara 1 damla damlatılarak floresan mikroskop altında inceleme yapıldı. Yapılan çalışmada 4 boya µl (Hematoksilen, Metilen Mavisi, Eosin B, Eosin Y) kullanıldı. Öncelikle boyaların molekül ağırlıklarına göre molarite hesabı yapıldı ve floresans yansıma veren en düşük derişimleri araştırıldı.Yapılan incelemeler sonunda Eosin B ve Eosin Y boyaları floresan ışıma verirken metilen mavisi ve hematoksilen boyalarında floresan ışıma görülmedi. Eosin B için en düşük derişim ve dolayısıyla en maliyeti düşük görüntü 10-5 derişiminde gözlendi. Eosin Y için en düşük derişim ve dolayısıyla en maliyeti düşük görüntü 10-4 derişiminde gözlendi. Bu işlem normosperm ve oligosperm üzerine ayrı ayrı uygulandı ve her ikisinde de bir fark gözlenmedi.Öneriyoruz ki bu boylar üzerinde yapılacak daha ileri araştırmalarla laboratuar floresan boya çalışmalarına daha ekonomik bir çözüm getirilecektir.

In this study seminal plasma (SP) samples obtained from patients who attended to Necmettin Erbakan University Meram Medical Faculty with preliminary diagnosis of infertility was included. The studied samples were biomedical waste status. To 1 ml SP 2 ml saline psysiologic was added, this final 3 ml cell suspension was divided to 3 ependorfs as 1 ml samples. To these samples 10 µl staining chemicals were added. After gentle pipetting the stain to homojenate it, 1 drops were placed to the slides for fluoresence microscopic inspection. Four stains, Eosin B, Eosin Y, Hematoxylin, Methylene Blue were studied to find the lowest staing concentrations according to molecular weight molarity calculations.It is observed that Eosin B and Eosin Y stains gave fluoresent radiance while the two other stains did not. The lowest flurosence radiance for Eosin B was obtained at 10-5 M and for Eosin Y 10-4. There was no any difference between normo and oligospermic patients sperm staining properties.It is suggesed that by further search this stains can bring economic solutions for fluorosent staing laboratory work.