Streptomyces yokosukanensis ATCC 25520`de δ-aminolevulinik asit dehidrataz enziminin biyokimyasal karakterizasyonu

Abstract

Bu çalışmada, nebularin olarak adlandırılan bir pürin ribosit antibiyotiğisentezleyen Streptomyces yokosukanensis ATCC 25520, δ-aminolevulinik asitdehidrataz (ALAD)'ının, amonyum sülfat ile çökeltmesi ve Sefakril S-200'de jelfiltrasyon tekniği sonucunda 90.76 kat saflaştırma gerçekleştirilmiştir. ncelenenverilere uygun olarak, enzimin tek polipeptidden oluştuğu ve molekülerağırlığının 34.8 kDa olduğu SDS-PAGE yöntemi ile saptanmıştır. Enziminoptimum sıcaklığı 45 ºC, ve optimum pH 'sı 8 olarak belirlenmiştir. Bazı ağırmetallerin; Pb2+ %61, Mg2+ %26, Co2+ %20, Fe3+ %51, Mn2+ %26, Zn2+ %36oranlarında inhibe ettiği ve ilginç olarak, Ni+2'nin enzim aktivitesini 15% arttırdığısaptanmıştır. Lineweaver-Burk grafiğinde, Vmax 30.3 µmol PBG/saat/mg proteinve Km değeri 1.21 mmol/reaksiyon karışım bulunmuştur.Anahtar Kelimeler: ALAD, enzim karakterizasyonu, Streptomycete,Streptomyces yokosukanensis, saflaştırma,

In this study, δ-aminolevulinic acid dehydratase (ALAD) fromStreptomyces yokosukanensis ATCC 25520, producer of an unusual purineriboside antibiotic called nebularine, was purified and characterized. Purificationprocuders involved with ammonium sulphate precipitation and following gelfiltration techniques by use of Sephacryl S-200. After Gel filtration a 90.76-foldpurification was obtained. According to the data obtained from investigation, theenzyme was found to be a single polypeptide having molecular mass around 34.8kDa. This was determined by SDS-PAGE. Its optimal temperature around 45 ºC,and optimal pH was found to be 8. Some heavy metals inhibited its activity ratioof Pb2+ %61, Mg2+ %26, Co2+ %20, Fe3+ %51, Mn2+ %26, Zn2+ %36. Surprisingly,Ni+2 increased its activity up to 15%. In Lineweaver-Burk plot, Vmax was found as30.3 µmol PBG/h/mg of protein and Km value 1.21 mmol/reaction mixture.Key words: ALAD, enzyme characterization, Streptomycete, Streptomycesyokosukanensis, purification.