İyi üretim uygulamaları standartlarında üretilmiş göbek kordonu kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin ilerleyen alt kültürlerindeki değişikliklerin çeşitli parametrelerle karşılaştırmalı olarak incelenmesi

Abstract

Bu çalışmadaki amaç; Klinik uygulamalar için İyi Üretim Uygulamaları Standartlarında (Good Manufacturing Practice-GMP) üretilmiş Göbek Kordonu kaynaklı Mezenkimal Kök Hücrelerin farklı alt kültürlerinde karakteristik özellikleri incelenerek klinik kullanımda en uygun alt kültürü bulmaktır. Çalışmada İyi Üretim Uygulamaları laboratuvarında biyogüvenlik kabininde geleneksel hücre kültürü teknikleri ile Mezenkimal Kök Hücrelerin farklı alt kültürleri (P2, P4 ve P6) çoğaltılmıştır. Bu alt kültürlerin, flow sitometri yöntemi ile yüzey belirteçleri, apoptoz durumları, hücre döngüsü durumları, yarı manuel kit ile RNA izolasyonu yapılarak, termal döngü cihazında sırasıyla cDNA sentezi ve eş zamanlı kantitatif Polimeraz Zincir Reaksiyonu yöntemleriyle pluripotensi genleri, Eliza yöntemi ile telomer boyları, Karyotipleme yapılarak kromozom durumları karşılaştırılmıştır. Çalışmanın sonuçlarında Göbek kordonunun Wharton jeli bölgesinden elde edilen mezenkimal kök hücrelerin klinik uygulamalar için kullanılmasında karşılaştırılan pasajlar (P2, P4, P6) arasında en uygunun P4 olduğu görülmüştür.

The purpose of this study; It is to find the most suitable subculture in clinical use by examining the characteristic features of Mesenchymal Stem Cells originating from Umbilical Cord produced in Good Manufacturing Practice (GMP) for clinical applications.Different subcultures (P2, P4 and P6) of the Mesenchymal Stem Cells were reproduced in the biosafety cabinet in the Good Manufacturing Practices laboratory with traditional cell culture techniques. These subcultures are surface markers, apoptosis states, cell cycle states, RNA isolation with the flow cytometry method, RNA isolation with semi-manual kit, pluripotency genes in the thermal loop device, and telomeres by the Eliza method, Karyotyping and chromosome states were compared.In the results of the study, it was found that P4 was the most suitable among these passages (P2, P4, P6) compared in the use of mesenchymal stem cells obtained from the Wharton jelly region of the umbilical cord for clinical applications.