Koyun ve kuzu akciğerinden izole edilen doku faktörü aktivitesinde lipitlerin etkisi

Abstract

Tromboplastin, Faktör III ve CD 142 adlarıyla da bilinen doku faktörü (DF) pıhtılaşma sistemini başlatmaktan sorumlu bir membran glikoproteinidir. Molekülün yapısında pıhtılaşma sisteminin aktivasyonunu başlatan fosfolipidler önem taşır. DF geçmişten günümüze pıhtılaşma sisteminin takibinde önemli bir araç olarak kullanılmaktadır. İlerleyen teknolojiyle DF'nin birçok hastalığın patogenezinde de etkin olduğu görülmüştür.Bu çalışmada koyun ve kuzu akciğerinden izole edilen DF'nin aktivitesinde lipitlerin etkisinin incelenmesi amaçlanmıştır. Bunun için DF ekstraktı ve saflaştırılmış DF hazırlandı. Lipidler ekstrakte edildi. Ekstraksiyonla ayrılan lipid ve protein kısımlarının, hazırlanan DF ekstraktının ve saflaştırılmış DF'nin aktivitesi protrombin zamanı testi ile tayin edildi. DF ekstraktı daha sonra kullanılmak üzere liyofilize edildi. Bu ekstraksiyon kullanılarak gravimetrik olarak toplam lipid tayini yapıldı. İnce tabaka kromatografisi (TLC) ile fosfolipidler belirlendi ve fosfolipid standartları kullanılarak major fosfolipidlerden fosfatidilkolin (PC), fosfatidiletanolamin (PE), fosfatidilserin (PS) ve sfingomiyelinin (SM) yerleri tesbit edildi. DF ekstraktındaki fosfolipid miktarlarını belirlemek için her bir örneğe fosfor tayini yapıldı.Kuzu akciğerinden elde edilen DF ekstraktı koyununkinden daha aktif bulunmuştur. DF'nin ekstraksiyonla ayrılan lipit kısmında aktivite görülürken, protein kısmında görülmemiştir. İkisi bir aradayken en yüksek aktiviteye sahip oldukları görülmüştür. Saflaştırma işlemi aktiviteyi düşürmüştür. DF'de fosfolipidlerin sıralaması PE>PC>PS>SM şeklinde tesbit edilmiştir.Bu çalışmanın sonuçları kendi ürettiğimiz DF'nin standardize edilerek protrombin zamanı testinde kullanılabileceğini göstermiştir ve bulgularımız tromboplastin üretiminde literatüre katkı sağlayacaktır.

The Tissue factor (TF), also known as thromboplastin, Factor III and CD 142 is a membrane glycoprotein responsible for initiating the clotting system. Phospholipids that activate the activation of the coagulation system in the molecular structure are important. TF is used has always been an important tool in the monitoring of the coagulation system. In parallel with the advancing technology, it is known that TF is also effective in the pathogenesis of many diseases.In this study, it was aimed to investigate the effect of lipids on the activity of TF isolated from sheep and lamb lung. For this, TF extract and purified TF were prepared and lipids were extracted. The activity of lipid and protein fractions separated by extraction, the TF extract prepared and the purified TF were determined by prothrombin time test. The TF extract was lyophilized for later use. Using this extraction, total lipid was determined by gravimetric method. Phospholipids were identified by thin layer chromatography (TLC) and major phospholipids such as phosphatidylcholine (PC), phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylserine (PS) and sphingomyelin (SM) were determined by using phospholipid standards. To determine the amounts of phospholipids in the TF extract, phosphors assignment have been done spectrophotometrically for each sample.The TF extract from lamb lung found more active than sheep lung. The TF activity was observed in the lipid fraction separated by extraction, but not in the protein fraction. A two together, it was found to have the highest activity. Purification decreased activity. Sequence of phospholipids in the TF obtained from lamb lung was determined as PE> PC> PS> SM.The results of this study show that the TF we produce can be standardized and used in the prothrombin time test and our findings will contribute to the literature in the production of thromboplastin.